[發(fā)明專利]應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310243434.X
• 申請日: 2013-06-19
• 公開（公告）號: CN103320393A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李陽;閆艷麗;劉雪;徐曉艷;王二先
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江美保龍生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

1.應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于包括以下工藝步驟：

1）種細(xì)胞的培養(yǎng)：用細(xì)胞生長液對種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)；

2）繁殖病毒用細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)：將步驟1）培養(yǎng)得到的種細(xì)胞懸浮液接種至灌注袋中，吸附后在生物反應(yīng)器中加入細(xì)胞生長液進(jìn)行懸浮培養(yǎng)；

3）病毒的培養(yǎng)與收獲：將小鵝瘟病毒懸液接種于生物反應(yīng)器中，換用維持液進(jìn)行培養(yǎng)，接毒后實(shí)時監(jiān)測糖耗情況，當(dāng)糖耗接近0時，即開始收獲病毒，收獲病毒后，反復(fù)凍融灌注袋，收獲全懸病毒液，經(jīng)檢驗(yàn)合格后置于-20℃保存。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于所述的步驟1）中種細(xì)胞為鵝胚成纖維傳代細(xì)胞系CGBQ。

3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于所述的步驟1）中種細(xì)胞采用方瓶培養(yǎng)法、轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)法或微型反應(yīng)器培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)。

4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于所述的步驟2）中生物反應(yīng)器為激流灌注式生物反應(yīng)器、攪拌式生物反應(yīng)器或潮汐式生物反應(yīng)器。

5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于所述的步驟2）中生物反應(yīng)器的微載體類型為聚酯纖維紙片，使用前用滅菌PBS浸泡過夜。

6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于所述的步驟2）中懸浮培養(yǎng)條件為：溫度37～38℃，pH7.0～7.6，溶解氧30%～60%，接種量為3～6×10⁹個細(xì)胞。

7.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于所述的步驟2）中懸浮培養(yǎng)時根據(jù)細(xì)胞糖耗情況隨時補(bǔ)糖或者補(bǔ)加細(xì)胞生長液，確保殘?zhí)遣坏陀?g/L。

8.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于所述的步驟3）中培養(yǎng)條件為：溫度37～38℃，pH7.4～7.6，溶解氧30%～50%。

9.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用鵝胚傳代細(xì)胞系和生物反應(yīng)器培養(yǎng)小鵝瘟病毒的方法，其特征在于所述的細(xì)胞生長液含90%Ham’s?F12K或者DMEM、10%胎牛血清，其pH為7.0～7.6、溶解氧為30%～60%，含糖4.0g/L；所述的維持液含97%Ham’s?F12K或者DMEM、3%胎牛血清，其pH為7.4～7.6、溶解氧為30%～50%，含糖4.0g/L。