[發明專利]一種mPEG-MAL-aGLP-1復合物

無效

• 申請號: 201310240089.4
• 申請日: 2013-06-18
• 公開（公告）號: CN103333238A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 黃靜;吳自榮;金麗;潘盈盈;楊芳
• 申請（專利權）人: 華東師范大學
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/107;A61K38/26;A61K47/48;A61P3/10
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

技術領域

本發明屬于肽或蛋白質的修飾復合物及其制備的技術領域，具體涉及一種單甲氧基聚乙二醇修飾的人胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like?Peptide1，GLP-1)衍生物(GLP-1衍生物，aGLP-1)，即，一種單甲氧基聚乙二醇-人胰高血糖素樣肽-1衍生物復合物。

背景技術

GLP-1首次于1987年被認定為一種葡萄糖依賴的腸分泌激素肽，主要由遠端回腸、結腸和直腸的L細胞分泌。這種含31個氨基酸的多肽通過靶細胞上的G蛋白偶聯受體傳遞信號，從而產生葡萄糖依賴性促胰島素釋放、刺激生長抑素釋放、抑制胰高血糖素分泌、抑制胃排空和胃酸分泌等生理作用，是一種治療糖尿病尤其是II型糖尿病的多肽藥物，具有廣泛的社會效益和巨大的經濟效益。

但是，GLP-1在體內很容易被二肽酰基肽酶IV(Dipeptidyl?Peptidase4，DPP?IV)降解為脫去N端His⁷-Ala⁸-殘基的無活性的GLP-1(9-37)或GLP-1(9-36)-NH₂。靜脈注射GLP-1在體內的半衰期僅為3～5分鐘，限制了GLP-1的臨床應用。

目前GLP-1治療糖尿病的研究方向之一是通過對GLP-1的結構進行改變，得到GLP-1衍生物，用該衍生物治療糖尿病，達到延長藥物在體內的藥效時間的目的。背景技術已經提出一種GLP-1衍生物及其制備方法(中國專利申請200910045188.0)，該衍生物半衰期長于GLP-1的半衰期，持續降血糖時間至少可達7小時。

經研究表明，蛋白質和多肽藥物經聚乙二醇(PEG)修飾后的顯著優點之一就是半衰期大大延長。但是，由于PEG-多肽/蛋白質復合物是通過蛋白質/多肽的氨基酸游離氨基和PEG的琥珀酰亞胺酯鍵形成的酰胺鍵連接在一起的復合物，若蛋白質/多肽上具有多個帶有游離氨基的氨基酸，則聚乙二醇修飾蛋白質/多肽的位點和修飾程度常難以控制，導致后續純化和質量控制都比較困難，制備步驟繁瑣、得率低、成本高。

發明內容

針對現有技術存在的PEG修飾蛋白質/多肽的修飾位點、修飾程度的不可控制的缺陷，本發明提出的aGLP-1衍生物復合物(mPEG-MAL-aGLP-1復合物)，將GLP-1衍生物(即aGLP-1)與單甲氧基聚乙二醇-馬來酰亞胺(即mPEG-MAL)進行加成反應，通過aGLP-1的C端氨基酸的巰基-SH與mPEG-MAL的末端雙鍵進行加成反應，得到定點修飾產物mPEG-MAL-aGLP-1復合物，從而避免了修飾位點的多態性，使后續純化大為簡便，得率高，成本低。mPEG-MAL-aGLP-1復合物保留了aGLP-1的生物學活性，并且與aGLP-1相比，半衰期進一步延長，持續降血糖時間甚至可達24小時，從而使一天給藥一次成為可能，可更好應用于糖尿病治療。此外，現有的GLP-1及其衍生物的給藥途徑均為注射給藥，而本發明提出的aGLP-1衍生物復合物，由于mPEG-MAL對其的包裹作用避免或減緩了胃腸道蛋白酶對aGLP-1衍生物的降解，口服給藥也有效，從而能更好地用于臨床。

本發明要解決的第一個技術問題是提出一種aGLP-1衍生物的復合物mPEG-MAL-aGLP-1，該復合物是由人胰高血糖素樣肽-1衍生物aGLP-1與單甲氧基聚乙二醇-馬來酰亞胺mPEG-MAL通過加成反應而連接構成，所述aGLP-1的C端氨基酸Cys上的巰基-SH與所述mPEG-MAL的末端雙鍵形成共價鍵而連接。該復合物是通過aGLP-1衍生物C端氨基酸的巰基-SH與單甲氧基聚乙二醇-馬來酰亞胺(mPEG-MAL)的末端雙鍵進行加成反應制備得到的單點修飾產物。

其中，該復合物中的aGLP-1衍生物指GLP-1衍生物，詳細見申請號為200910045188.0的中國發明專利“一種GLP-1衍生物”。該復合物中的mPEG-MAL是從商業公司購買的單甲氧基聚乙二醇-馬來酰亞胺，其分子量為2～40KD。

本發明還提供所述mPEG-MAL-aGLP-1復合物的制備方法。本發明將aGLP-1衍生物與mPEG-MAL進行加成反應，即aGLP-1衍生物C端氨基酸的巰基-SH與單甲氧基聚乙二醇-馬來酰亞胺(mPEG-MAL)的末端雙鍵進行加成反應，得到定點修飾產物mPEG-MAL-aGLP-1復合物，所述的mPEG-MAL分了量為2～40KD。

本發明mPEG-MAL-aGLP-1復合物的制備方法，具體包括如下操作步驟：