[發明專利]MLL1抗體和表達抑制劑在制備治療急性髓性白血病的藥物中的應用

有效

• 申請號: 201310238830.3
• 申請日: 2013-06-14
• 公開（公告）號: CN103272233A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 姚婕;方立超;鄭峻松
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K31/7088;A61K48/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，涉及物質的醫藥用途。

背景技術

急性白血病是嚴重危害人類健康的造血系統惡性腫瘤，占全國各年齡段惡性腫瘤死亡率的第6位，占兒童和35歲以下人群惡性腫瘤死亡率的第1位。

正常造血過程依賴于造血調控因子在細胞不同分化階段有效的活化與失活。研究結果表明，同源盒（HOX）基因與造血調控有關。HOX基因家族是一類在進化過程中高度保守的基因，存在于酵母至人類的幾乎所有真核細胞中，均含有1個約180個核苷酸的同源異型盒，可以轉錄出約60個氨基酸的同源蛋白質區段，其編碼產物為一類轉錄因子。近來有研究發現，HOXA10基因定向表達于髓細胞，并且在造血發育過程中具有雙重調節作用，其持續過表達有助于維持髓細胞的高增殖能力，阻止髓細胞的分化，最終導致急性髓性白血病（AML）。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于通過研究HOXA10在AML細胞中的表達調控機制，探討HOXA10調控作為AML防治新靶點的可能性，進而提供一種通過調控HOXA10表達治療AML的藥物。

對HOXA10啟動子區域的結構分析表明，HOXA10啟動子區域包含2個雌激素反應元件（ERE）：ERE1和ERE2，并且ERE在HOXA10啟動子區域的位置靠近轉錄起始位點，提示HOXA10的表達可能與雌激素受體（ER）的活化相關。另有文獻報道，HOXA10啟動子CpG島在AML患者中呈低甲基化或不甲基化狀態，導致HOXA10基因持續過表達，而在正常人中HOXA10啟動子CpG島呈甲基化狀態，導致HOXA10基因低表達或不表達，提示HOXA10的表達可能是通過其啟動子CpG島甲基化修飾調控。MLL（mixed?lineage?leukemia）蛋白具有組蛋白H3K4特異性甲基化轉移酶（HMT）的功能，能特異性調控組蛋白H3K4甲基化，而H3K4的甲基化可導致基因啟動子CpG島低甲基化。文獻還報道，MLL蛋白家族作為ER的輔調節因子調控雌二醇（E₂）介導的E₂敏感基因的活化。

為此，本發明首先以不同濃度的E₂在不同時間點刺激AML細胞株HL-60，以不刺激的HL-60細胞作參照，應用RT-PCR和Western?blot檢測HOXA10基因表達活性的差異，以明確E₂對HOXA10表達的活化作用，并在E₂刺激下以反義寡核苷酸轉染技術分別敲除ERα、ERβ和MLLs（MLL1-4）后再檢測HOXA10mRNA和蛋白表達的變化，確定哪一種ER的活化與HOXA10的表達相關，哪一種MLL對HOXA10表達有調控作用；繼而采用染色質免疫共沉淀（ChIP）實驗檢測E₂刺激前后MLL和HOXA10啟動子上ERE1和ERE2的相互作用，再通過Western-blot檢測E₂刺激前后組蛋白H3K4甲基化狀態以明確MLL是否通過表觀遺傳學途徑調控HOXA10的表達；最后使用MLL1抗體處理AML細胞，觀察其對AML細胞的影響。結果顯示：在E₂50nmol/L6h刺激下HOXA10表達明顯升高，ERα和ERβ反義寡核苷酸轉染后HOXA10表達均有下降，MLL1表達沉默時HOXA10表達明顯降低，MLL1可以結合到HOXA10啟動子上的ERE區域而組蛋白H3K4甲基化狀態在E₂刺激后明顯高于刺激前，對AML細胞使用MLL1抗體處理阻斷MLL1導致HOXA10表達下降并引起AML細胞凋亡。由此得出以下結論：AML細胞的HOXA10基因表達受MLL1蛋白調控，MLL1介導的HOXA10表達的改變是AML的防治新靶點，應用MLL1抗體阻斷MLL1或者通過基因工程技術抑制MLL1的表達均可以達到降低HOXA10表達進而治療AML的目的。

由此，本發明提出如下技術方案：

1．MLL1抗體在制備治療AML的藥物中的應用。

2．MLL1表達抑制劑在制備治療AML的藥物中的應用。

進一步，所述MLL1表達抑制劑為MLL1反義寡核苷酸。

進一步，所述MLL1反義寡核苷酸序列如SEQ?ID?No.5所示。