[發(fā)明專(zhuān)利]一種制備紅汁乳菇菌根的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310238366.8
• 申請(qǐng)日: 2013-06-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103314782A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 冀瑞卿;李玉;朱姝蕊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01G1/04
• 分類(lèi)號(hào): A01G1/04;C05G1/00
• 代理公司: 深圳市君勝知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 44268
• 代理人: 楊宏

1.一種制備紅汁乳菇菌根的方法，其包括以下步驟：

A、采用組織分離法，在無(wú)菌條件下取紅汁乳菇的菌柄與菌蓋之間的組織接種于PDA試管斜面培養(yǎng)基上，待所述PDA試管斜面培養(yǎng)基組織塊兒上長(zhǎng)出菌絲后，將所述菌絲的一部分轉(zhuǎn)接到WAY試管上進(jìn)行避光培養(yǎng)得到的純凈紅汁乳菇菌絲，另一部分轉(zhuǎn)通過(guò)液體培養(yǎng)得到紅汁乳菇液體菌劑，最后一部分通過(guò)紅汁乳菇的二級(jí)種培養(yǎng)，制得固體菌劑；

B、將上述純凈紅汁乳菇菌絲、紅汁乳菇液體菌劑與固體菌劑分別接種到一年苗齡的板栗無(wú)菌苗之根系上培育至少三個(gè)月，從板栗無(wú)菌苗之根系上得到紅汁乳菇菌根。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟A具體的包括：待WYA平板培養(yǎng)基長(zhǎng)滿(mǎn)紅汁乳菇菌絲后，可以直接作為再生菌種菌劑備用；待WAY平板培養(yǎng)基長(zhǎng)滿(mǎn)紅汁乳菇菌絲后，用直徑0.5cm的打孔器在WYA試管斜面培養(yǎng)基上打孔，得到菌片，將菌片投入WY培養(yǎng)液中培養(yǎng)，在每250mLWY培養(yǎng)液中加入5-6個(gè)菌片，接種后靜止24小時(shí)-48小時(shí)后，在溫度為28℃，轉(zhuǎn)速為160r/min的電子恒溫震蕩箱中，持續(xù)培養(yǎng)10天-15天后制得液體菌劑備用；待WYA試管斜面培養(yǎng)基長(zhǎng)滿(mǎn)紅汁菇菌絲后，將其接種到二級(jí)種培養(yǎng)袋中培養(yǎng)支撐固體菌劑備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟A具體的還包括：待WYA試管斜面培養(yǎng)基長(zhǎng)滿(mǎn)紅汁菇菌絲后，將其接種到二級(jí)種培養(yǎng)袋中培養(yǎng)支撐固體菌劑備用。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟A中PDA試管斜面培養(yǎng)基由馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂粉與水組成，其重量份分別為：

馬鈴薯為100份-200份，葡萄糖10份-20份，瓊脂粉15份-20份，水500份-1000份。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟A中WYA試管斜面培養(yǎng)基由葡萄糖、氯化鐵、氯化鈉、氯化鈣、磷酸二氫鉀、磷酸氫二銨、硫酸鎂、鹽酸硫銨素、瓊脂粉與水組成，其重量份分別為：

葡萄糖800份-1000份，氯化鐵1份-10份，氯化鈉2份-10份，氯化鈣3份-10份，磷酸二氫鉀10份-100份，磷酸氫二銨10份-50份，硫酸鎂10份-30份，鹽酸硫銨素0.1份-1份，瓊脂粉1000份-2500份，水500份-2000份。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟A中WY試管斜面培養(yǎng)基由葡萄糖、氯化鐵、氯化鈉、氯化鈣、磷酸二氫鉀、磷酸氫二銨、硫酸鎂與鹽酸硫銨素組成，其重量份分別為：

葡萄糖800份-1000份，氯化鐵1份-10份，氯化鈉2份-10份，氯化鈣3份-10份，磷酸二氫鉀10份-100份，磷酸氫二銨10份-50份，硫酸鎂10份-30份，鹽酸硫銨素0.1份-1份。

7.根據(jù)權(quán)利要1所述的方法，其特征在于，所述步驟B具體的包括：

B1、將板栗種子用0.3-0.5%高錳酸鉀浸泡6-8小時(shí)表面消毒，之后無(wú)菌水洗滌至水無(wú)色，盛放在鋪滿(mǎn)脫脂棉的培養(yǎng)盤(pán)中，然后將所述培養(yǎng)盤(pán)放置于25℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2天，每間隔10小時(shí)-14小時(shí)用無(wú)菌水對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行保濕。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟B具體的還包括：

待所述步驟B1中70%以上的板栗種子裂口后，將所有板栗種子播種于裝填有無(wú)菌培養(yǎng)基質(zhì)的培養(yǎng)缽中，將培養(yǎng)缽放置于培養(yǎng)室內(nèi)，所述培養(yǎng)室濕度為60%-75%，溫度為20℃-25℃，并且每間隔5天-8天對(duì)培養(yǎng)缽澆水一次，培養(yǎng)一年得到所述待栽培板栗無(wú)菌苗。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述步驟B具體的還包括：所述無(wú)菌培養(yǎng)基質(zhì)由珍珠巖、蛭石與草炭土組成，珍珠巖、蛭石與草炭土按照體積比為1:4:5的比例混合。