[發明專利]人自身免疫性疾病潰瘍性結腸炎診斷試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201310237858.5
• 申請日: 2013-06-17
• 公開（公告）號: CN103293301A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 楊武;尚建平;寧義剛
• 申請（專利權）人: 天津瑞華生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 王柱

技術領域

本發明屬于免疫分析領域診斷試劑盒技術領域，尤其是涉及一種人自身免疫性疾病潰瘍性結腸炎診斷試劑盒及其制備方法。通過鑒別、診斷獲取抗體信息，研發針對靶點的生物大分子藥物，并對患者開展個性化診療及用藥。

背景技術

炎癥性腸病(IBD)是一組病因尚不十分明確的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，主要包括潰瘍性結腸炎(UC)和克羅恩病(CD)兩個相對獨立的疾病。IBD在西方國家多見，亞洲國家的發病率和患病率低于西方，但近年來呈明顯上升趨勢。我國IBD發病率也逐年增高，其中UC最多，危重病例也逐漸增多。

該病的發病原因目前仍在研究之中。從病理學上看，炎癥性腸病被認為是由于人體的免疫系統對一些胃腸道細菌的過度免疫反應所造成的自身免疫性損傷。臨床上主要表現為不明原因的腹瀉，以及發燒，腹痛，直腸出血等。隨著病情的發展，有些病人還出現不同程度的腸道外癥狀(如肝臟方面的疾患，關節炎，皮膚和眼睛方面的癥狀)。炎癥性腸病發生在各個人群的不同年齡段。在過去的幾十年里，炎癥性腸病在全球的發病率呈逐漸上升的趨勢。據不完全的估計，目前在我國的發病總人數約在一百萬左右，其中潰瘍性結腸炎占得比率較高。臨床上對炎癥性腸病的治療主要包括了手術和藥物治療。但炎癥性腸病在治療后常有反復，許多病人需要反復多次的手術治療。除了疾病本身對病人造成痛苦以外，心理壓力和經濟負擔也很大。

炎癥性腸病的診斷和鑒別診斷對于治療方案的決定至關重要。傳統上對炎癥性腸病的診斷和對克羅恩病與潰瘍性結腸炎的鑒別診斷主要是依賴X光和內窺鏡檢查，并通過活檢來確診。實驗室的檢測僅限于一些非特異性方法，如C-反應蛋白的檢測和對血細胞的計數。這些指標特異性差，診斷參考價值有限。正因為如此，臨床上需要一個更為特異的簡單和低價的體外檢測手段。天津瑞華生物科技有限公司開發了一個全新的有自主知識產權的體外診斷炎癥性腸病的方法。從原理上說這些標識物的存在和在血液中含量的升高提示了體內特異免疫反應的升高。而這些特異免疫反應的升高與炎癥性腸病，包括克羅恩病與潰瘍性結腸炎的發病和發展有密切的相關性。

臨床研究報告表明炎癥性腸病(IBD)患者血清中抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCA)對IBD診斷和鑒別診斷有很重要的臨床意義。通過對病患血清中ANCA抗體的監測，可以給臨床醫生提供免疫抑制治療的參考依據，并通過抗體的有無以及抗體含量的高低，對病患進行與普通驗證的區別和對確診病例進行臨床治療的跟蹤監測。

發明目的

本發明的目的是提供一種檢測對炎癥性腸病潰瘍性結腸炎特異的的血清標識物的免疫分析測定方法和依據該方法制備的檢驗試劑盒，及一種針對特異靶點的生物大分子藥物的研發。(1)測定內容的獨特性和專有性：目前在中國所要檢測的全部標識物都屬創新產品，而針對標識物所開發的炎癥性腸病體外診斷試劑也是目前中國體外診斷試劑市場中在炎癥性腸病方面唯一的產品。(2)測定試劑盒的靈敏性，特異性，重復性，和可靠性：該方法靈敏，特異并且重復性好，測定結果可靠性強。可以在血清反應很低時或者在疾病發生發展的早期階段測到待測物。與其他一些非特異炎癥測試方法不同，本測試方法能夠可靠地檢測炎癥性腸病潰瘍性結腸炎特有的血清標識物。(3)測定試劑盒的臨床應用價值：瑞華生物科技有限公司對炎癥性腸病標識物的檢測技術包含了對標識物的檢測以及在測定過程中結合免疫熒光技術可以鑒別靶抗原的類型。這些檢測結果可協助醫生對炎癥性腸病的診斷，同時這些結果對治療預后和治療監控也提供了重要的參考價值。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

人自身免疫性疾病潰瘍性結腸炎診斷試劑盒，其特征是：所述的試劑盒包括：

待檢測血清標識物的標準品；

包被有標識物特異抗原系統的固相板；

聯接有辣根過氧化酶的標識物的抗體；

洗滌液；

辣根過氧化酶底物的溶液；

終止液。

優選的方案為標識物為抗人中性粒細胞抗原免疫球蛋白G。

優選的方案為聯接有辣根過氧化酶的標識物的抗體為抗非人類免疫球蛋白G抗體。

優選的方案為的辣根過氧化酶底物的溶液包含A液和B液，其中A液為過氧化氫溶液，B液為四甲基聯苯胺溶液或者A液為四甲基聯苯胺，B液為醋酸鈉/枸櫞酸緩沖液。

優選的方案為辣根過氧化酶連接抗體的采用碘酸鈉法制備。

優選的方案為洗滌液為磷酸鹽緩沖液。

優選的方案為終止液為硫酸。