[發明專利]一種腫瘤外切酶體疫苗的提取方法及其應用

無效

• 申請號: 201310235443.4
• 申請日: 2013-06-14
• 公開（公告）號: CN103340903A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發明（設計）人: 曹利平;陳炯煌;闕日升
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K35/16
• 分類號: A61K35/16;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種腫瘤外切酶體疫苗的提取方法，其特征在于，通過以下步驟實現：

?（1）提取：胎牛血清在4℃條件下，離心6h，除去內源性exosome，人膽管癌細胞在含10％的胎牛血清的1640培養液中，培養約72h，收集培養基上清，按藥品生產質量管理規范標準提取腫瘤外切酶體，上清液離心5分鐘，轉移至新的離心管離心30分鐘，再轉移至新的離心管離心30分鐘，去除細胞碎片；上清液再用millipore公司超濾管離心30分鐘；將濃縮液移至30?g／L的蔗糖重水墊上，超速離心60分鐘，取出蔗糖重水墊，稀釋到50ml的PBS中，再用超濾管離心，直至體積<5?ml，以0.22um的濾器過濾除菌，分裝后置于-80℃冰箱備用；

（2）提取裂解超濾液：取超速離心后的exosome沉淀，加入去離子水10ml，低滲法使exosome破膜，用millipore公司超濾管離心30分鐘去除miRNA提純exosome裂解超濾液。

2.根據權利要求1所述的一種腫瘤外切酶體疫苗的提取方法在獲得不含miRNA的exosome裂解超濾液中應用。