[發(fā)明專(zhuān)利]一種豬血清中豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌的檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310234942.1
• 申請(qǐng)日: 2013-06-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103267847A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹杰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津天澤畜禽養(yǎng)殖專(zhuān)業(yè)合作社
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/569
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/569
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209
• 代理人: 王來(lái)佳

1.一種豬血清中豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌的檢測(cè)方法，其特征在于：步驟如下：

⑴隨機(jī)抽取規(guī)模場(chǎng)的仔豬及育肥豬血清樣品；

⑵間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)待檢豬血清中的豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌抗體

①將豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌間接血凝試劑盒中的陰陽(yáng)性對(duì)照、抗原恢復(fù)室溫；

②在V型110度板上進(jìn)行微量間接血凝試驗(yàn)，200倍倍比稀釋血清，做陰陽(yáng)性對(duì)照，加樣處理好后放入37℃恒溫箱中靜置1.5h后觀(guān)察判斷結(jié)果，豬血清中檢測(cè)到豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌，檢測(cè)結(jié)果即為陽(yáng)性；

⑶豬胸膜肺炎ELISA試劑盒檢測(cè)待檢豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌抗體；

①將試劑盒取出，盒內(nèi)試劑恢復(fù)室溫并充分搖勻；

②將200倍稀釋后的樣本和對(duì)照加入板孔中，每孔50uL，陰陽(yáng)性對(duì)照均為雙份；

③蓋上膜，37℃維持60min；

④去膜，用300uL的洗液清洗3次，最后一次在吸水紙上將平板拍干；

⑤每孔加50uL酶標(biāo)抗體；

⑥重復(fù)步驟③；

⑦重復(fù)步驟④；

⑧加入50uL底物溶液，輕搖2秒；

⑨將平板放入黑暗中在20-25℃作用15min；

⑩加入50uL終止液，輕搖2s，10min內(nèi)在405nm下讀數(shù)并記錄結(jié)果，判定標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)判定，豬血清中檢測(cè)到豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌，檢測(cè)結(jié)果即為陽(yáng)性；

⑷步驟⑴及步驟⑵的檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，則豬血清中檢測(cè)到豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血清中豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟⑴中豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌間接血凝試劑盒購(gòu)自蘭州獸醫(yī)研究所。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬血清中豬胸膜肺炎放線(xiàn)桿菌的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟⑵中豬胸膜肺炎ELISA試劑盒購(gòu)自法國(guó)LSI公司。