[發(fā)明專利]SPA-抗體三聚體的試劑盒及其用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310223279.5
• 申請日: 2010-01-13
• 公開（公告）號: CN103361313A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張厚亮
• 申請（專利權(quán)）人: 王信
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 鄔震中

本發(fā)明是名稱為“SPA-抗體三聚體、含有該三聚體的細(xì)胞處理試劑盒及其制備方法和用途”（申請?zhí)?01010022753.4、申請日2010年01月13日）的發(fā)明專利分案申請專利。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及葡萄球菌A蛋白（staphylococalprotein?A，以下簡稱SPA）-抗體三聚體的細(xì)胞處理試劑盒及其用途。

技術(shù)背景

SPA能與人及多種哺乳動物血清IgG分子中的Fc片段結(jié)合。結(jié)合的親和性次序依次是豬、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛。SPA除與IgG結(jié)合外，還能與血清中少量的IgM和IgA結(jié)合，SPA菌對各類免疫球蛋白的吸附率：IgG為90%～98%，IgM為2%～30%，IgA為1.5%～20%。

出現(xiàn)共沉反應(yīng)的SPA與IgG必須有兩個結(jié)合部位，它們分別在Fc和Fab段上,缺一雖能與SPA結(jié)合，但不出現(xiàn)共沉反應(yīng)，這種Fab的參與并非SPA－抗體反應(yīng)?，F(xiàn)已研究表明，IgG與SPA的結(jié)合部位是CH₂和CH₃的交界處。

SPA應(yīng)用很廣，但所有應(yīng)用的原理都離不開SPA具有與IgG的Fc段的結(jié)合能力，主要應(yīng)用方面如下：

1.SPA菌的協(xié)同凝集作用

用已知的標(biāo)準(zhǔn)血清，吸附到SPA菌的表面,使之成為吸附抗體的載體,再以此去診斷相應(yīng)的未知抗原而產(chǎn)生肉眼可見的凝集顆粒,診斷的抗原可以是顆粒性的,也可以是可溶性的。此種凝集相當(dāng)于反向間接血凝,但省去間接血凝中的抗體純化,紅血球鞣化等復(fù)雜手續(xù),而只需要SPA菌體及粗制免疫血清即可。所以此法簡單、快速,特異性敏感性均較滿意。

2.作為廣譜第二抗體

用SPA代替抗體IgG的第二抗體，有如下優(yōu)點：①SPA制備容易，性質(zhì)穩(wěn)定，易純化，對人和多種哺乳動物的IgG都能應(yīng)用,不受種屬限制。②SPA的結(jié)合力強(qiáng)，相當(dāng)于游離抗體與抗原的結(jié)合力，對人和兔的親和常數(shù)均為10³L/克分子，結(jié)合后對IgG的活性無影響。無論在0℃、37℃、44℃及56℃幾乎均能立即結(jié)合而無需長時間的孵育，因此可以縮短試驗時間；③SPA容易標(biāo)上¹²⁵I、熒光素、辣根過氧化物酶、鐵蛋白等，因此可與多種技術(shù)相結(jié)合；④SPA分子高度均一，它不是免疫球蛋白，不受Fc受體影響，所以有較高的抗IgG特異性。

3.用于提取純化IgG利用SPA與IgG的結(jié)合特性提取IgG，比常規(guī)采用硫酸銨、Sephadex柱，DEAE柱或免疫梯度離心等法要簡便得多，而且純度好。

4.檢測和提純IgM?IgM在病毒的早期診斷中具有重要意義，為了檢測特異性IgM抗體，必須首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的辦法，利用此法也為IgM的提純開辟了道路。

5.其它方面用于免疫復(fù)合物的檢測、體外激活補(bǔ)體功能試驗、細(xì)胞表面標(biāo)記以及腫瘤表面抗原的檢測等。

干細(xì)胞（stem?cell)是指具有無限或較長期的自我更新能力，并能分化出至少一種高度分化子代細(xì)胞的細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞來源將干細(xì)胞分成胚胎性干細(xì)胞和成體干細(xì)胞，而成體干細(xì)胞包括自體干細(xì)胞和異體干細(xì)胞。

目前國內(nèi)外的最新進(jìn)展促使“骨髓干細(xì)胞”移植血管新生的作用機(jī)理、機(jī)體內(nèi)環(huán)境對干細(xì)胞療效的影響以及轉(zhuǎn)基因骨髓源干細(xì)胞的作用進(jìn)行進(jìn)一步的研究，以提高干細(xì)胞的治療效果。

臨床上的治療過程中主要采集骨髓或外周血來源的單個核細(xì)胞進(jìn)行移植，并認(rèn)為其中的CD34+或CD133＋/VEGF-R2+細(xì)胞為血管新生的干/祖細(xì)胞，但這類細(xì)胞的增殖分化功能、他們的歸巢到血管損傷部位的能力以及達(dá)到治療效果的有效數(shù)量等都是尚未充分了解的內(nèi)容。

表面抗原（Lineage?surface?antigen）是當(dāng)干細(xì)胞分化為各系的祖細(xì)胞和成熟細(xì)胞時，會出現(xiàn)各系的專一性標(biāo)志，如淋巴系CD19/CD7/粒細(xì)胞系CD13、CD11、CD15、CD16,紅細(xì)胞系的CD47、CD51、CD71,巨核細(xì)胞系的CD31/CD41/CD42/CD61/CD63/CD107，T/NK系的CD2/CD25/CD7,這些在特定類型的血細(xì)胞表面出現(xiàn)的抗原通稱為系表面抗原，Lin抗原陽性就可以確定為祖細(xì)胞和成熟細(xì)胞，還有許多Lin抗原陰性的細(xì)胞稱之為原始干細(xì)胞，如CD34/CD133/SCA-1/CD38等等。我們可以根據(jù)各科室不同要求去除相關(guān)的成熟細(xì)胞系。