[發(fā)明專利]金黃色葡萄球菌分離的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310219458.1
• 申請(qǐng)日: 2013-06-05
• 公開（公告）號(hào): CN103333818A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏華;許恒毅;徐鋒;萬(wàn)翠香
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/445
• 代理公司: 南昌新天下專利商標(biāo)代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.金黃色葡萄球菌SA分離的方法，其特征在于包括以下步驟：每稱取1.0?mg樹狀分子，懸浮于4?mL?0.01?mol/L，pH?8.0?PBS磷酸緩沖液中，攪拌滴加25%的戊二醛水溶液?545?μL，使戊二醛的終濃度為3%，在搖床150?r/min的轉(zhuǎn)速下室溫反應(yīng)3.5?h?；滴加金黃色葡萄球菌SA特異性抗體1mL，使其終濃度達(dá)到3?mg/mL左右；搖床150?r/min?的轉(zhuǎn)速下室溫反應(yīng)24?h；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結(jié)束將得到的溶液冷凍干燥得樹狀分子-抗體復(fù)合物；（2）取15?mg?長(zhǎng)鏈生物素，懸浮于4?mL?0.01?mol/L，pH?8.0?PBS磷酸緩沖液中，攪拌滴加25%的戊二醛水溶液545?μL，使戊二醛的終濃度為3%；在搖床150?r/min的轉(zhuǎn)速下室溫反應(yīng)3.5?h?；加入0.53?mg步驟（1）所得樹狀分子-抗體復(fù)合物，在搖床150?r/min的轉(zhuǎn)速下室溫反應(yīng)24?h；減壓旋干溶劑，去離子水溶解，在PBS和去離子水中透析1?d；透析結(jié)束將得到的溶液冷凍干燥得長(zhǎng)鏈生物素-樹狀分子-抗體復(fù)合物；（3）取1?mL待測(cè)樣品溶液，加入0.1?mg?SA抗體和長(zhǎng)鏈生物素共修飾的樹狀分子即步驟（2）長(zhǎng)鏈生物素-樹狀分子-抗體復(fù)合物，置于混勻儀上，以30?rpm的轉(zhuǎn)速室溫孵育15?min，加入0.1?mg修飾有鏈霉親和素的納米磁珠，置于混勻儀上，以30?rpm的轉(zhuǎn)速在室溫孵育15?min；常規(guī)磁力架分離3?min；（4）去離子水輕輕清洗后，用PBS緩沖液重懸即得富集有金黃色葡萄球菌的納米磁珠-鏈霉親和素-長(zhǎng)鏈生物素-樹狀分子-抗體-SA復(fù)合物。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述樹狀分子為氨基化的聚酰胺-胺型樹枝狀高分子PAMAM-G4，其分子量為14215?Da。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述修飾了鏈霉親和素的納米磁珠粒徑為20-50nm，優(yōu)選為30?nm。