[發明專利]K99-987P-F41重組蛋白及其應用

無效

• 申請號: 201310218959.8
• 申請日: 2013-06-05
• 公開（公告）號: CN103275228A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 倪宏波;郎秀艷;張洋龍;邢思疑;蔣慧婷;劉嬌
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K39/116;A61K39/108;A61P31/04
• 代理公司: 大慶市建華專利事務所 23119
• 代理人: 孫薇

1.一種K99-987P-F41重組蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示。

2.編碼權利要求1所述的K99-987P-F41重組蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。

3.一種權利要求1所述的K99-987P-F41重組蛋白的制備方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：

（1）根據GenBank已發表的產腸毒素大腸桿菌黏附素K99、987P、F41基因全序列（登錄號分別為M35282.1、M35257.1、M21788.1）設計引物，以大腸桿菌C83912、大腸桿菌C83916、大腸桿菌C83919的基因組為模板，PCR分別擴增出目的片段；

（2）三個片段串聯連入載體pET30a，構建表達載體pET30a-K99-987P-F41；

（3）表達載體pET30a-K99-987P-F41轉化至大腸桿菌感受態細胞，IPTG誘導表達獲得重組蛋白。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述的引物序列如下，其中下劃線為酶切位點：

P1：K99(F)：CGGGGTACCATGACTATTAACTTCAATGGCAAA（KpnI）（SEQ?ID?No.3）；

P2：K99(R)：CGCGGATCCTGAAGTAGTAAATACGCCAGC(BamHI)（SEQ?ID?No.4）；

P3：987P(F)：CGCGGATCCGGTGGTGGTGGTTCTGCTGAAAACAACACCAGCCAG(BamHI)（SEQ?ID?No.5）；

P4：987P(R)：CGAGCTCACTAGCAGTGACAGTACCGGC(SacI)（SEQ?ID?No.6）；

P5：F41(F)：CGAGCTCGGCGGTGGCGGCAGCGTATCTGGTTCAGTGATGGCT(SacI)（SEQ?ID?No.7）；

P6：F41(R)：AAGGAAAAAAGCGGCCGCACTGAGGTCATCCCAATTGTG(NotI)（SEQ?ID?No.8）。

5.權利要求1所述的K99-987P-F41重組蛋白在制備產腸毒素大腸桿菌疫苗中的應用。