[發明專利]特利加壓素的制備方法

無效

• 申請號: 201310214366.4
• 申請日: 2013-05-31
• 公開（公告）號: CN103254295A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 路兵;徐偉;張鴻雁
• 申請（專利權）人: 青島國大生物制藥股份有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京康盛知識產權代理有限公司 11331
• 代理人: 張良

1.一種特利加壓素的制備方法，其特征在于，包括：

用脫保護試劑將Rink?AmideAM樹脂脫保護，去除Fmoc保護基團；

以脫保護后的Rink?AmideAM樹脂為起始原料，以Fmoc保護的氨基酸為單體，以HOBt/DIC為縮合劑，依次耦聯氨基酸，得到特利加壓素肽樹脂；耦聯第2～12位氨基酸之前，用所述脫保護試劑依次脫去上一位耦聯產物的Fmoc保護基團；

裂解所述特利加壓素肽樹脂，然后加入乙醚沉淀所述特利加壓素肽樹脂，得到還原型特利加壓素粗肽；

將所述還原型特利加壓素粗肽環化得到氧化型特利加壓素粗肽；

將所述氧化型特利加壓素粗肽純化、轉鹽、濃縮和凍干得到特利加壓素。

2.如權利要求1所述的特利加壓素的制備方法，其特征在于，所述脫保護試劑的制備方法為：將哌啶溶于DCM/DMF/NMP溶液中，并加入曲拉通-100，制備得到所述脫保護試劑，其中，DCM/DMF/NMP的體積比=1:1:1，哌啶占所述脫保護試劑的體積百分比為20%，曲拉通-100占所述脫保護試劑的體積百分比為1%；所述脫保護的反應溫度為15℃。

3.如權利要求1所述的特利加壓素的制備方法，其特征在于：所述RinkAmideAM樹脂的替代度≤0.6mmol/g。

4.如權利要求1～3任一項所述的特利加壓素的制備方法，其特征在于：耦聯第1位氨基酸時，Rink?AmideAM樹脂：氨基酸：HOBt：DIC的摩爾比為1:3:3:3；耦聯第2至第6位氨基酸時，上一位耦聯產物：氨基酸：HOBt：DIC的摩爾比為1:3:3:3；耦聯第7至第12位氨基酸時，上一位耦聯產物：氨基酸：HOBt：DIC的摩爾比為1:3.3:3.3:3.3；耦聯第7～12位氨基酸時，所述脫保護試劑的每次體積用量比耦聯第1位氨基酸時增加20%。

5.如權利要求4所述的特利加壓素的制備方法，其特征在于：所述耦聯的溫度為32℃，時間為2.5～3小時。

6.如權利要求1所述的特利加壓素的制備方法，其特征在于：所述裂解的裂解液各成分的體積比為TFA:EDT:TIS:H₂O=92.5:2.5:4:1，裂解時間為2h。

7.如權利要求1所述的特利加壓素的制備方法，其特征在于：所述環化的氧化劑為雙氧水，pH值為7.1～7.2，時間為2小時。

8.如權利要求1所述的特利加壓素的制備方法，其特征在于：所述純化的色譜柱為直徑5cm、填料為粒徑10um的十八烷基鍵合硅膠、孔徑的C18柱，流動相分別為TFA溶液和乙腈，流速為50ml/min，上樣量為3～5g，色譜儀的檢測波長為280nm。

9.如權利要求1所述的特利加壓素的制備方法，其特征在于：所述轉鹽包括離子轉換、去離子、平衡和洗脫，所述轉鹽的色譜柱為直徑5cm、填料為粒徑10um的十八烷基鍵合硅膠、孔徑的C18柱，流速為50ml/min，上樣量為5～10g，色譜儀的檢測波長為280nm；其中，所述離子轉換的流動相分別為乙酸銨和乙腈，所述去離子的流動相分別為純水和乙腈，所述平衡的流動相分別為冰醋酸和乙腈，所述洗脫的流動相分別為冰醋酸和乙腈。

10.如權利要求1所述的特利加壓素的制備方法，其特征在于：所述濃縮的溫度為33℃，真空度≤10mbar。