[發明專利]快速檢測尿液C肽的膠體金免疫層析試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310213313.0
• 申請日: 2013-06-02
• 公開（公告）號: CN103630692A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 劉輝宇
• 申請（專利權）人: 劉輝宇
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 蚌埠鼎力專利商標事務所有限公司 34102
• 代理人: 白京萍

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及檢測尿液C肽的快速檢測試劑盒及膠體金免疫層析測試法，具體地說是一種應用競爭抑制原理的膠體金免疫層析法實現對尿液中C肽進行定量檢測的方法。

背景技術

食物攝入過多、消耗少、能量正平衡可能導致許多代謝性紊亂或疾病，如肥胖、2型糖尿病、多種心血管疾病（如動脈粥樣硬化、高血壓，冠心病等）、脂肪肝，心血管疾病等等，是當前人們極其關心的健康議題。目前在中國，已有超過50%的中國人有超重和體重過多的擔憂，逾30％的人肥胖，有近10-20%的中國人罹患由此而來的代謝紊亂或疾病，如隱性糖尿病、2型糖尿病等。這些人得到醫學治療或醫療幫助的不多，除非他們有很嚴重的代謝性紊亂、晚期糖尿病或其并發癥。其余的則通常不尋求醫學咨詢或醫療協助。

基礎胰島素水平升高是這些代謝性紊亂或疾病的重要原因。采取措施控制基礎胰島素水平，如增加運動和控制飲食等，可能能降低罹患這類代謝紊亂或疾病的風險。測試基礎胰島素水平，可以評估罹患上述疾病的風險。因此，動態監檢測基礎胰島素水平，可以預知自身的健康狀況。很有必要發明一種家用或診所用動態監測裝置，能方便地檢測基礎胰島素水平。然而，胰島素穩定性低、半衰期短，直接測量體液（包括血液，尿液等）中的胰島素水平非常困難。C肽和胰島素是胰島β-細胞分泌的胰島素原降解的產品。C肽與胰島素是等摩爾量從胰腺分泌釋放入血。而且，C肽在尿液中比胰島素要穩定得多。因此，測定和分析C肽比胰島素更準確。目前，通常測量人血液樣本或24小時的尿液樣本中的C肽，來評估胰島β-細胞功能。送檢樣本通常被送往正規實驗室，需幾天后才可返回結果。顯然，需要一個更快更方便的方法來跟蹤檢測基礎C肽水平。膠體金免疫層析法已被廣泛用來檢測人體小分子和各類蛋白，如檢測50納克/毫升的肉毒桿菌神經毒素、0.68納克/毫升的絨毛膜腎上腺素和0.1納克/毫升的降鈣素原。

發明內容

為解決背景技術中提到的方便測試基礎胰島素水平的方法需求，本發明提供了一種簡單、可靠、成本低廉、靈敏度高的快速檢測尿液C肽的膠體金免疫層析試劑盒及其檢測方法。

為了達到本發明的目的，本發明技術方案如下：一種快速檢測尿液C肽的膠體金免疫層析試劑盒，包括長方體狀盒體、位于盒體內底部的長條形黏貼支架，在黏貼支架上方從左到右依次黏貼有樣本墊、金結合物墊、硝酸纖維素膜、吸水墊；在硝酸纖維素膜上中間部位從左到右設有一道檢測線和一道控制線；其特點是：所述的樣本墊材質為玻璃纖維膜，經過主要含Tris、酪蛋白鈉鹽、PVP-10的處理液進行處理過夜；所述的金結合物墊是由經過含Tris、S-17、牛血清白蛋白等的專用處理液處理過的玻璃纖維膜構成，含有膠體金抗C肽抗體交聯物；所述的硝酸纖維素膜上的檢測線為包被有固相化的C肽抗原的T線，T線包被的固相化的C肽量高于樣本中能與金結合物墊中膠體金交聯抗體的C肽量。所述的硝酸纖維素膜上的控制線為包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體的C線。

一種快速檢測尿液C肽的膠體金免疫層析檢測方法，其特點是：被檢測樣本為尿液，采用上述快速檢測尿液C肽的膠體金免疫層析試劑盒，被檢測樣本為尿液，采用上述權利要求1至2任意一項所述的快速檢測尿液C肽的膠體金免疫層析試劑盒；1）用加油槍加100ul或用滴定管加3滴尿液樣本到樣本墊上。或者手持檢測端，垂直把樣本墊至刻度處浸入尿液樣本中1秒鐘；2）平放靜置2-15分鐘；3）2分鐘后，進行定性或半定量檢測，對比試劑盒附帶的比色卡，估計尿液C肽含量范圍；4）或者等待15分鐘，使用專用的定量讀數儀，進行定量檢測尿液樣本的C肽濃度。

本發明運用膠體金標記鼠單克隆抗C肽單克隆抗體，以競爭抑制法這一技術來實現對尿液中C肽的定量檢測。該方法用于測定尿液C肽以評估過夜饑餓后的基礎胰島素水平；該方法也可被用于測定血液中C肽含量。正常人尿液中基礎C肽水平低于1.8納克/毫升，膠體金免疫層析法適應于檢測正常人尿液中基礎C肽水平；本發明是一種家用或診所用動態監測裝置，能方便地檢測尿液C肽水平。其檢測靈敏度達到0.25?ng/ml水平；填補了國內外空白。本發明成本低、使用方便、靈敏度高、檢測時間短，可以快速檢測尿液C肽的濃度。

附圖說明

圖1是本發明快速檢測尿液C肽的膠體金免疫層析試劑盒的結構示意圖。

圖2是本發明的0-4納克/毫升C肽的比色卡的標準測試顏色。

具體實施方式