[發(fā)明專利]同時檢測三種腹瀉原蟲的試劑盒及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310211666.7
• 申請日: 2013-05-31
• 公開（公告）號: CN103276088A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 扈慶華;姜伊祥;張仁利;石曉路;黃達(dá)娜
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市疾病預(yù)防控制中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64
• 代理公司: 深圳中一專利商標(biāo)事務(wù)所 44237
• 代理人: 張全文

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種同時檢測三種腹瀉原蟲的試劑盒及檢測方法。

背景技術(shù)

腹瀉是一種常見的多發(fā)性疾病，其病因有很多種，以細(xì)菌性感染最為多見，同時，原蟲腹瀉也比較常見。通常指的原蟲腹瀉，主要是指寄生于腸道或鄰近臟器內(nèi)，以腹瀉及相關(guān)癥狀為其或某一階段主要臨床表現(xiàn)的寄生蟲病。腹瀉可能由于寄生蟲（原蟲）損害腸壁組織引起，其中有的蟲種主要損害腸微絨毛及絨毛，有的則造成腸壁的炎癥及潰瘍，周圍形成明顯的細(xì)胞浸潤反應(yīng)。引起腹瀉的原蟲主要有：溶組織內(nèi)阿米巴、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲、毛首鞭形線蟲、日本血吸蟲、隱孢子蟲、結(jié)腸小袋纖毛蟲等。其中溶組織內(nèi)阿米巴、隱孢子蟲和藍(lán)氏賈第鞭毛蟲都能寄生在人體腸道內(nèi)，可以引起患者腹瀉。

溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoeba?histolytica?Schaudinn)屬內(nèi)阿米巴科的內(nèi)阿米巴屬，其可引起阿米巴病。

藍(lán)氏賈第鞭毛蟲（Giardia?lamblia?Stiles）簡稱賈第蟲。寄生人體小腸、膽囊主要在十二指腸，可引起腹痛、腹瀉和吸收不良等癥狀，致賈第蟲病（giardiasis），為人體腸道感染的常見寄生蟲之一。

隱孢子蟲（Cryptosporidium）是營寄生生活的單細(xì)胞原蟲，其屬于原生動物界。迄今報道過的隱孢子蟲蟲種有：微小隱孢子蟲（C．parvum），小鼠隱孢子蟲（C．muris），火雞隱孢子蟲（C．meleagridis），蛇隱孢子蟲（C．serpentis），魚隱孢子蟲（C．nasorum）等，其中對人和大多數(shù)脊椎動物造成感染的主要是微小隱孢子蟲（C．p．）。微小隱孢子蟲是一種重要的呈世界性分布的機會性致病原蟲，可引起人畜共患的隱孢子蟲病。

由于上述三種寄生蟲（原蟲）對人類存在危害，因此有必要對其采取預(yù)防性措施，即通過檢測它們的存在來防止其引發(fā)人體的腹瀉。而現(xiàn)有技術(shù)中通常采用傳統(tǒng)的染色方法對這些原蟲進(jìn)行鑒定，這些染色法操作繁瑣，且需要對三種寄生蟲（原蟲）分別進(jìn)行檢測，因此延長了檢測周期。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上問題，本發(fā)明實施例提供一種同時檢測三種腹瀉原蟲（即溶組織內(nèi)阿米巴、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲、隱孢子蟲）的PCR檢測試劑盒，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中檢測針對性單一，檢測周期長的問題。

本發(fā)明實施例是這樣實現(xiàn)的，一種PCR檢測試劑，包含PCR反應(yīng)液、DNA聚合酶，還包括以下引物和探針：

針對溶組織內(nèi)阿米巴的引物和探針：

正向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAACAGTTTATTGTCATCAAGCATGGTG-3’SEQ?ID?NO:1，

反向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAAACTATTCTGATTGTTTCTTCCGTTG-3’SEQ?ID?NO:2，

探針：5’-CGGGGAGGAGGAGTAGGAAAGTTGACATTCCCCG-3’SEQ?ID?NO:3；

針對藍(lán)氏賈第鞭毛蟲的引物和探針：

正向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAAACGGCTCAGGACAACGGTT-3’SEQ?ID?NO:4，

反向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAAGTCTTGGCGCCGGGTT-3’SEQ?ID?NO:5，

探針：5’-CCAGCGTGCTAGCCGGACACCGCTGG-3’SEQ?ID?NO:6；

針對隱孢子蟲的引物和探針：

正向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAATGGTGGGCATTCCTTTGC-3’SEQ?ID?NO:7，

反向引物：5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAACCGTTTGTCCTTCTGGTTTTG-3’SEQ?ID?NO:8，

探針：5’-CGGTGGCTGAATTAGAATCGACATGCCCACCG-3’SEQ?ID?NO:9；

其中各條探針序列5’端連接有熒光基團(tuán)，3’端連接有淬滅基團(tuán)；

該檢測試劑還包括如下Homo-tag：

5’-GCAAGCCCTCACGTAGCGAA-3’SEQ?ID?NO:10。

本發(fā)明實施例的另一目的在于提供一種PCR檢測試劑盒，該PCR檢測試劑盒包含本發(fā)明提供的PCR檢測試劑。