[發明專利]一種比伐盧定的制備方法

無效

• 申請號: 201310210329.6
• 申請日: 2013-05-30
• 公開（公告）號: CN103319570A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 宓鵬程;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張廣育;姜建成

技術領域

本發明涉及一種肽制備方法，尤其地涉及一種比伐盧定的制備方法。

背景技術

比伐盧定(Bivalirudin)是一種應用于臨床的凝血酶抑制劑，早期的臨床研究表明比伐盧定抗凝治療效果確切，且出血事件的發生率較低，和傳統的肝素抗凝治療相比使用更為安全。比伐盧定可通過結合于催化劑位點和循環及凝血酶血塊的陰離子輸出位點而直接抑制凝血酶的作用。

比伐盧定(Bivalirudin，又名Angiomax)是人工合成抗凝藥物，其抗凝成分為水蛭素衍生物C端20個氨基酸殘基的肽。結構序列為D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH。比伐盧定屬于強有力的凝血酶直接抑制劑，是近年來臨床應用較廣的藥物。

關于比伐盧定的制備方法，國內外已有大量報道。主要有固相依次偶聯方法。由于比伐盧定結構中含有一個-Gly-Gly-Gly-Gly片段，因此在固相依次偶聯-Gly過程中，Gly自身特性使得極易在主峰前后產生Bivalirudin-Gly和Bivalirudin+Gly的雜質，這兩個雜質在后續分離時很難去除。中國專利201110170669和中國專利201110144317均采用了Fmoc-Gly-Gly-Gly-Gly-OH作為反應原料來解決上述Gly雜質的問題。但是，上述專利方法需要自制，步驟繁瑣，不利于工業化生產。

發明內容

為了解決以上缺點，本發明旨在找到合適的偶聯條件，能夠在順序偶聯的基礎上，有效的控制Gly雜質的產生，以利于工業化生產。固相合成時，氨基酸偶聯一般采用2h甚至更長的反應時間以確保偶聯的完全。本發明意外的發現，在合成-Gly-Gly-Gly-Gly肽鏈時，通過提高氨基酸(Fmoc-Gly-OH)投料比例，并縮短反應時間，能夠有效解決BIV合成中Gly雜質的問題。

本發明的第一方面提供一種比伐盧定的制備方法，包括以下步驟：

1)選擇合適的固相載體；

2)制得Fmoc-Leu-固相載體；

3)脫除Fmoc保護后以1-3倍的投料比加入相應氨基酸進行偶聯，從而依次完成Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH的偶聯；

4)脫除Fmoc保護后以4-8倍的投料比加入Fmoc-Gly-OH進行偶聯，重復偶聯4次；

5)脫除Fmoc保護后以1-3倍的投料比加入相應氨基酸進行偶聯，從而次完成Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-D-Phe-OH的偶聯，得到比伐盧定肽樹脂；

6)用裂解試劑將比伐盧定從肽樹脂上裂解下來，得到粗肽；

7)所述粗肽經過純化，轉鹽，最終得到精制比伐盧定。

在一些實施方案中，步驟1)中所述的固相載體為Wang樹脂。

在另一些實施方案中，步驟4)中Fmoc-Gly-OH的偶聯體系選自DIC/HOBt、HATU/HOAt/DIPEA、PyBOP/HOBt/DIPEA中的一種。在一個優選的實施方案中，步驟4)中Fmoc-Gly-OH的偶聯反應時間為10min-30min。

在又一些實施方案中，步驟6)中所述的裂解試劑為TFA、TIS個H2O的混合物。在一個優選的實施方案中，TFA∶TIS∶H2O＝92∶4∶4(V∶V)。

在再一些實施方案中，步驟7)中所述的純化為反相高效液相色譜純化。在一個優選的實施方案中，所述反相高效液相色譜的色譜柱為反相C18柱。在另一個優選的實施方案中，步驟7)中所述的轉鹽是轉成三氟乙酸鹽形式。

具體實施方式

縮寫及含義