[發明專利]人蒼白桿菌活性填料及其制備方法有效
| 申請號： | 201310206422.X | 申請日： | 2013-05-29 |
| 公開（公告）號： | CN103266099A | 公開（公告）日： | 2013-08-28 |
| 發明（設計）人： | 李琳;劉俊新 | 申請（專利權）人： | 中國科學院生態環境研究中心 |
| 主分類號： | C12N11/14 | 分類號： | C12N11/14;C12N11/08;B01D53/84;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京鼎佳達知識產權代理事務所(普通合伙) 11348 | 代理人： | 王偉鋒 |
| 地址： | 100085*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 蒼白 桿菌 活性 填料 及其 制備 方法 | ||
1.一種脫除含硫惡臭物質的人蒼白桿菌活性填料，所述人蒼白桿菌活性填料附載有人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1菌懸液，人蒼白桿菌(Ochrobactrum?anthropi)SL1保藏編號為CGMCC?No.7400；
所述填料為輕質多孔的聚氨酯泡沫塊、顆粒活性炭、火山巖、珍珠巖中的一種或多種材料。
2.根據權利要求1所述脫除含硫惡臭物質的人蒼白桿菌活性填料，所述填料密度為0.7-1.0kg/m3,孔隙率為50-96%，粒徑為5-50mm。
3.根據權利要求1所述脫除含硫惡臭物質的人蒼白桿菌活性填料，所述的微生物菌懸液與輕質多孔填料的質量比為50-300∶10。
4.根據權利要求1所述脫除含硫惡臭物質的人蒼白桿菌活性填料，所述的人蒼白桿菌活性填料中人蒼白桿菌(Ochrobactrum?anthropi)SL1菌體濃度大于106CFU/g(活性填料)。
5.根據權利要求1所述脫除含硫惡臭物質的人蒼白桿菌活性填料，所述填料為聚氨酯泡沫塊。
6.根據權利要求1所述脫除含硫惡臭物質的人蒼白桿菌活性填料，所述填料密度為0.9kg/m3,孔隙率為86%，粒徑為30mm。
7.根據權利要求1所述的脫除含硫惡臭物質的人蒼白桿菌活性填料制備方法，步驟如下：
(1)斜面培養：培養制備人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1CGMCC?No.7400斜面菌種；
所述的人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1斜面培養基組成為：葡萄糖0.5g，KH2PO42.0g，K2HPO42.0g，KNO32.0g，NH4Cl0.5g，MgCl2·6H2O0.2g，FeSO4·7H2O0.01g，Na2S2O3·5H2O5.0g,瓊脂20g，水1000ml，pH值6.8-7.2，121℃滅菌20min；
(2)菌懸液的制備：將步驟(1)制備的人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1斜面菌體按5-20%接種量逐級發酵培養，分離獲得菌體濃度為0.4-0.8g/L人蒼白桿菌(Ochrobactrum?anthropi)SL1菌懸液；
人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1菌懸液制備方法如下；
人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1斜面菌體按5-20%接種量逐級發酵培養，培養溫度36℃,培養時間48h，通風量5-200L/min，溶解氧>2.0mg/L,罐壓0.03-0.10Mpa,發酵液置于冷凍離心機中于4℃，2000-8000rpm，離心濃縮5-20min，棄去上清液，沉淀用無菌營養液稀釋，獲得菌體濃度為0.4-0.8g/L人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1菌懸液；
所述的人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1液體發酵培養基的組成為：葡萄糖0.5g，KH2PO42.0g，K2HPO42.0g，KNO32.0g，NH4Cl0.5g，MgCl2·6H2O0.2g，FeSO4·7H2O0.01g，Na2S2O3·5H2O5.0g,水1000ml，pH值6.8-7.2，121℃滅菌20min；
所述的人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1無菌營養液的組成為：葡萄糖0.5g，KH2PO43.0g，K2HPO43.0g，NH4H2PO40.5g，MgCl2·6H2O0.2g，FeCl30.01g，水1000ml，pH值6.8-7.2；121℃滅菌20min；
(3)人蒼白桿菌活性填料的制備：
(a)將步驟(3)制備的微生物菌懸液噴淋到方塊體或顆粒形狀的輕質多孔材料的表面；(b)將帶有人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1的多孔材料塊（或顆粒）放入旋轉混合器中旋轉混合；(c)再次向輕質多孔材料表面噴淋微生物菌懸液，獲得人蒼白桿菌活性填料，4℃保存備用；
優選的重復步驟(a)-(c)2-3次，使材料表面以及微孔中均附載有菌細胞，獲得人蒼白桿菌活性填料。
8.根據權利要求7所述的脫除含硫惡臭物質的人蒼白桿菌活性填料制備方法，
所述的人蒼白桿菌活性填料制備步驟如下：
(1)斜面培養：制備人蒼白桿菌(Ochrobactrum?sp)SL1斜面菌種；
所述的人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1斜面培養基組成為：葡萄糖0.5g，KH2PO42.0g，K2HPO42.0g，KNO32.0g，NH4Cl0.5g，MgCl2·6H2O0.2g，FeSO4·7H2O0.01g，Na2S2O3·5H2O5.0g,瓊脂20g，水1000ml，pH值6.8-7.2，121℃滅菌20min；
(2)菌懸液的制備：人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1斜面菌體10%接種量逐級發酵培養，分離獲得菌體濃度為0.6g/L人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1菌懸液；
人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1菌懸液制備方法如下；
人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1斜面菌體按10%接種量逐級發酵培養，培養溫度36℃培養時間48h，通風量100L/min，溶解氧>2.0mg/L,罐壓0.06Mpa,發酵液置于冷凍離心機中于4℃，5000rpm，離心濃縮10min，棄去上清液，沉淀分別用無菌營養液稀釋，分別獲得菌體濃度為0.5g/L人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1菌懸液；
所述的人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1液體發酵培養基的組成為：葡萄糖0.5g，KH2PO42.0g，K2HPO42.0g，KNO32.0g，NH4Cl0.5g，MgCl2·6H2O0.2g，FeSO4·7H2O0.01g，Na2S2O3·5H2O5.0g,水1000ml，pH值6.8-7.2，121℃滅菌20min；
所述的人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1無菌營養液的組成為：葡萄糖0.5g，KH2PO43.0g，K2HPO43.0g，NH4H2PO40.5g，MgCl2·6H2O0.2g，FeCl30.01g，水1000ml，pH值6.8-7.2；121℃滅菌20min；
(3)微生物菌懸液的制備：人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1菌懸液中菌體總濃度為0.5g/L；
(4)人蒼白桿菌活性填料的制備：(a)將步驟(3)制備的微生物菌懸液通過泵和噴淋頭噴淋到方塊體或顆粒形狀的輕質多孔材料的表面；噴淋速度為10L/min，噴淋時間為60min；同時進行攪拌，攪拌速度為100rpm，攪拌時間為100min；使菌懸液與輕質多孔充分接觸；(b)將帶有人蒼白桿菌（Ochrobactrum?anthropi）SL1細胞的多孔材料塊放入旋轉混合器中，于10rpm轉速下旋轉混合50min；隨著混合器的轉動，附著在輕質多孔材料表面的菌細胞由于離心力的作用進入到孔隙內部；(c)再次向輕質多孔材料表面噴淋微生物菌懸液，同時進行攪拌；獲得人蒼白桿菌活性填料，4℃保存備用；
優選的重復步驟(a)-(c)3次，使材料表面以及微孔中均附載有菌細胞，獲得人蒼白桿菌活性填料。
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