[發明專利]一種檢測DNA損傷誘導的早期核仁應激的試劑盒及其應用有效
| 申請號： | 201310201625.X | 申請日： | 2013-05-27 |
| 公開（公告）號： | CN103293321A | 公開（公告）日： | 2013-09-11 |
| 發明（設計）人： | 金雅瓊;李淑艷;賈弘禔 | 申請（專利權）人： | 北京大學 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139 | 代理人： | 孫皓晨;韓小雷 |
| 地址： | 100871*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 dna 損傷 誘導 早期 核仁 應激 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種檢測DNA損傷誘導的早期核仁應激的試劑盒，包括：一抗標記E2F1特異性抗體、對應一抗來源的熒光二抗、固定液、透化液、封閉液、細胞核染料、封片劑、陽性對照。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的一抗標記E2F1特異性抗體為一抗標記兔來源多克隆E2F1抗體，所述的熒光二抗Alexa?Fluor488標記的羊抗兔Ig?G。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的固定液為由pH7.2-7.4的pH7.2-7.4的PBS配制的4％多聚甲醛。
4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的透化液為含有0.5％Triton-X100的pH7.2-7.4的pH7.2-7.4的PBS；所述的封閉液為含有0.2％Triton-X100的pH7.2-7.4的PBS配制的5％BSA。
5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的細胞核染料為Hoechst33342；所述的封片劑為甘油與pH7.2-7.4的PBS的體積比例為9∶1。
6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的陽性對照為阿霉素。
7.權利要求1-7所述的試劑盒在制備檢測DNA損傷誘導的早期核仁應激試劑中的應用。
8.權利要求1-7所述的試劑盒在檢測DNA損傷誘導的早期核仁應激中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，操作步驟如下：
(1)免疫熒光法標記E2F1和DNA
將制備好的細胞中加入一抗標記E2F1特異性抗體及對應一抗來源的熒光二抗，然后棄去二抗孵育液，加入Hoechst33342對DNA進行標記；
(2)熒光顯微鏡測量E2F1在核仁與核基質中免疫熒光強度比值
當檢測樣品的比值大于對照樣品的比值時，且單因素方差分析或T檢驗結果有顯著性差異則DNA損傷誘導的核仁應激發生。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述的一抗標記為兔來源多克隆E2F1抗體，所述的熒光二抗為Alexa?Fluor488標記的羊抗兔Ig?G。
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