[發明專利]一種北極紅點鮭三倍體苗種的制備方法

有效

• 申請號: 201310195501.5
• 申請日: 2013-05-23
• 公開（公告）號: CN103250667A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 徐紹剛;李文通;田照輝;楊曉飛;楊貴強
• 申請（專利權）人: 北京市水產科學研究所
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

技術領域

本發明涉及水產生物育種技術領域，具體地涉及一種北極紅點鮭三倍體苗種的制備方法。

背景技術

鮭鱒魚是世界目前主要養殖的魚類之一,由于其自身的品質和對生活環境的特殊要求,決定了它綠色、環保營養食品的性質,因此頗受消費者的青睞。鮭鱒魚是我國目前主要的冷水性養殖魚類,隨著我國鮭鱒魚養殖的迅速發展，基礎理論研究相對滯后，鮭鱒魚親魚種質退化導致苗種質量退化生產效益下降等問題逐漸突出，從而制約了鮭鱒魚養殖業的可持續發展。利用現代生物技術，培育生長迅速、個體大、肉質好、抗病能力強的種苗，將成為我國鮭鱒魚養殖業的持續、穩定、健康發展的必由之路。

與普通的二倍體魚類相比，三倍體魚類具有生長速度快、成活率高、抗病力強、肉質好、安全健康等優點：①三倍體魚類生長速度比二倍體快30-40%，有利于生產大型個體，可有效的提高群體產量；②鮭科三倍體魚類不育，避免了性腺發育階段和產卵季節因能量轉移和婚姻色出現而導致的魚肉品質下降及表觀特征變化，避免了其繁殖期生物學死亡，延長養殖周期；③三倍體魚類對環境沒有潛在的威脅，三倍體可減少魚類的基因混雜，有效控制自然水域中魚類的過度繁殖，避免養殖品種的退化，保護物種的多樣性；④沒有外來基因，屬于人類可以安全食用的健康食品，比起轉基因技術更為人們所接受；⑤三倍體魚肉質鮮嫩、可食部分高、體形穩定美觀、商品價值高。由于三倍體魚類具有上述優勢，因此通過三倍體制備技術獲得生長快速、適應性和抗病力強的優質苗種具有巨大的潛力。

自上世紀80年代以來,三倍體魚類的人工誘導工作取得了長足進展。目前對三倍體苗種制備的研究主要集中在純種虹鱒魚的三倍體制備，其方法為熱休克法或靜水壓方法。現有熱休克方法制備純種三倍體虹鱒魚的技術是當在26.5℃的條件下，受精卵發眼率為67.80%-70.28%，魚苗三倍體率能夠達到50%-65%；當在28℃條件下，受精卵發眼率為29.78%-32.75%，魚苗三倍體率能夠達到80.95%-83.18%；在30℃條件下，能夠得到非常高的三倍體率，達到90%以上，但其發眼率通常不超過10%，且苗種畸形率高，始終無法形成規模化生產，其原因為現有的純種生產三倍體苗種制備技術或無法達到生產要求的三倍體率或無法達到可用于生產的苗種成活率，一直無法實現規模化生產。因此，迫切需要一種技術成熟、效果穩定且能規模化生產的三倍體魚苗制備技術，提高受精卵的發眼率和苗種三倍體率。

6-二甲基氨基嘌呤（N6-Dimethyladenine,6-DMAP）在多種貝類多倍體誘導中取得了良好效果，但由于鮭鱒魚對生長環境水質要求較高，特別對化學物質敏感，至今未有6-二甲基氨基嘌呤應用于鮭鱒魚三倍體誘導的成功報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種北極紅點鮭三倍體苗種的制備方法，以克服現有技術的不足。

本發明提供的北極紅點鮭三倍體苗種的制備方法，包括以下步驟：

1）使北極紅點鮭親魚卵子和精子體外受精；

2）6-二甲基氨基嘌呤處理受精卵；

3）受精卵在養殖用水中孵化。

其中，步驟1）的北極紅點鮭魚卵受精溫度是6-8℃。

步驟1）北極紅點鮭親魚培育水溫為8-10℃，流水池水交換量為2h/次。

所述步驟1）分別將北極紅點鮭親魚魚卵和精液取出，精液用孵化用水清洗，方法為精液與孵化用水的體積比為1-1.5：2500-3000，攪拌1-1.5min后倒掉水，同樣方法反復沖洗3-5次；按照雄性親魚與雌性親魚1：2-4的尾數比例進行精子與卵子的受精。

本發明制備方法的步驟2）中，受精卵在受精12-14min后，將受精卵移入220-240mg/L的6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）溶液中浸泡處理。

優選地，受精卵在受精12min后，移入6-二甲基氨基嘌呤溶液中浸泡處理。6-二甲基氨基嘌呤溶液的溫度為9-11℃。浸泡時間為14-16min。

將步驟2）浸泡處理的受精卵迅速移入6-8℃孵化水體中孵化55-65天，得到北極紅點鮭三倍體仔魚。

本發明還提供了6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP)在制備北極紅點鮭三倍體苗種中的應用。

進一步地，采用濃度為220-240mg/L、溫度為9-11℃的6-二甲基氨基嘌呤溶液處理北極紅點鮭受精卵。