[發明專利]具有吸附重金屬離子功能的融合蛋白的構建、表達及其在生物除污中的應用

有效

• 申請號: 201310188599.1
• 申請日: 2013-05-20
• 公開（公告）號: CN103288967A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 王宏;劉斌;楊海濤;伍建軍;張紹偉;高社
• 申請（專利權）人: 廣州柏縱生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/74;C12N1/21;A61K8/64;A61K8/99;A61K35/74;A61K38/16;A61K47/48;A61P39/02;C12R1/25;C12R1/245;C12R1/01
• 代理公司: 北京市漢信律師事務所 11373
• 代理人: 王文生

1.一種包含金屬結合多肽和連接肽的十聚體與皮膚細胞黏附三肽的融合蛋白，

其中，金屬結合多肽與連接肽連接，位于所述融合蛋白的N端，，共有十次重復，構成所述金屬結合多肽和連接肽的十聚體，皮膚細胞黏附三肽位于所述融合蛋白的C端，

其中所述金屬結合多肽的氨基酸序列如SEQ?ID?No：1所示，所述連接肽的氨基酸序列如SEQ?ID?No：2所示，皮膚細胞黏附三肽的氨基酸序列如SEQ?ID?No：3所示，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No：4所示。

2.一種在乳酸菌細胞表面展示表達權利要求1的融合蛋白的方法，所述方法包括以下步驟：

1)利用細胞表面表達載體構建在細胞表面表達權利要求1所述的融合蛋白的重組表達載體；

2)將步驟1)中構建的重組表達載體轉化到乳酸菌細胞中；

3)在適于以表面展示形式表達所述融合蛋白的條件下培養步驟2)中被轉化的乳酸菌，由此在所述乳酸菌細胞表面展示表達出權利要求1的融合蛋白。

3.權利要求2所述的方法，其中所述乳酸菌細胞選自干酪乳桿菌(Lactobacillus?casei，Orla-Jensen)細胞，糞腸球菌細胞，例如，糞腸球菌OGIX、FA2-2，或植物乳桿菌細胞，優選干酪乳桿菌細胞。

4.權利要求2所述的方法，其中所述適于在乳酸菌表面展示表達所述融合蛋白的條件是指在乳酸菌培養基中，37℃厭氧靜置培養24小時，其中所述乳酸菌培養基的成分為：基于培養基總重量，1重量％肉蛋白胨、1重量％牛肉膏、0.5重量％酵母提取物、2重量％葡萄糖、0.5重量％乙酸鈉、0.1重量％吐溫80、0.2重量％磷酸鉀、0.2重量％檸檬酸銨、0.01重量％硫酸鎂以及0.0005重量％硫酸錳，pH＝6.5。

5.一種在細胞表面展示表達權利要求1的融合蛋白的乳酸菌細胞。

6.權利要求1所述的融合蛋白或權利要求5所述的乳酸菌細胞在制備用于結合皮膚表面有毒重金屬的化妝品或藥物中的應用。

7.權利要求6所述的應用，其中所述重金屬選自鉛、鎘、汞或它們的任意組合。

8.權利要求6所述的應用，其中權利要求1所述的融合蛋白或權利要求7所述的乳酸菌細胞以凍干粉針、溶液劑、噴霧劑或凝膠劑的形式存在。

9.一種去除皮膚表面有毒重金屬的藥物或化妝品，所述藥物或化妝品包含有效量的權利要求1所述的融合蛋白或權利要求5所述的乳酸菌細胞。

10.權利要求9所述的藥物或化妝品，其中所述重金屬選自鉛、鎘、汞或它們的任意組合；并且所述藥物或化妝品以凍干粉針、溶液劑、噴霧劑或凝膠劑的形式存在。