[發明專利]一種家畜精液冷凍保護劑及其應用

有效

• 申請號: 201310186446.3
• 申請日: 2013-05-20
• 公開（公告）號: CN103262837A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 許曉玲;劉彥;白佳樺;馮濤;黃正
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京瑞思知識產權代理事務所(普通合伙) 11341
• 代理人: 王加嶺;李濤

技術領域

本發明涉及家畜人工授精的改良技術領域，具體涉及一種能夠提高家畜冷凍精液品質的冷凍保護劑及其制備方法。

背景技術

精液冷凍保存是指將精液經過特殊處理后置于液氮（-196℃）或干冰（-79℃）中，使得精子的代謝活動狀態暫時停止，從而可達到長時間保存該物種種質資源，切實發揮良種公畜的遺傳資源的目的。該技術可以大大提高優良公畜的利用率，減少飼養量，節約成本，可直接幫助農牧民增產增收。同時還可以緩解目前國內人畜爭糧問題，減少溫室氣體排放，降低由于退耕還草引起的種植業生產壓力。該技術使得優良基因不受時間、地域的限制，是一種能把優秀的遺傳資源廣泛傳播的有效手段。

雖然家畜精液冷凍技術在家畜育種以及種質資源保存等方面都有重要意義，但是家畜的精液冷凍保存技術目前很難推廣應用，主要是由于家畜精子本身對溫度變化特別敏感，在冷凍過程中極易損傷，從而使家畜冷凍精液生產難度系數加大，解凍后精子復蘇率低，導致母畜的受胎率低、窩產仔數少。該技術難題嚴重制約著家畜品種的改良和育種進程。

發明內容

本發明的目的是針對現有問題與不足，提供一種能有效延長家畜精子超低溫冷凍保存存活效率以及有利于維持精子頂體完整性的家畜精液冷凍保護劑。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種家畜精液冷凍保護劑，包括A液和B液，所述A液每升包含以下物質：40-60g葡萄糖，1-2g乙二胺四乙酸，3-6g二水檸檬酸鈉，0.5-3g碳酸氫鈉，0.1-0.5g氯化鉀，8×10⁵-1.2×10⁶IU青霉素，8×10⁵-1.2×10⁶IU鏈霉素；所述B液每升包含以下物質：17.5-28g果糖，14-24g三羥甲基氨基甲烷，7-16g檸檬酸，8×10⁵-1.2×10⁶IU青霉素，8×10⁵-1.2×10⁶IU鏈霉素，1-5%甘油，1-5%DMF，1-5%乙二醇，18-25%蛋黃。

優選地，所述A液每升包含以下物質：50g葡萄糖，1.5g乙二胺四乙酸，4g二水檸檬酸鈉，1g碳酸氫鈉，0.1g氯化鉀，1×10⁶IU青霉素，1×10⁶IU鏈霉素；所述B液每升包含以下物質：21.9g果糖，18.25g三羥甲基氨基甲烷，10.95g檸檬酸，1×10⁶IU青霉素，1×10⁶IU鏈霉素，2%甘油，2%DMF，2%乙二醇，20%蛋黃。

本發明的另一個目的是提供一種精液冷凍保護劑在提家畜生產性能上的應用。其包括步驟：

步驟一制備A液：

將40-60g葡萄糖，1-2g乙二胺四乙酸，3-6g二水檸檬酸鈉，0.5-3g碳酸氫鈉，0.1-0.5g氯化鉀，8×10⁵-1.2×10⁶IU青霉素，8×10⁵-1.2×10⁶IU鏈霉素，加蒸餾水稀釋到1L，混勻后消毒。

步驟二制備B液：

將17.5-28g果糖，14-24g三羥甲基氨基甲烷，7-16g檸檬酸，8×10⁵-1.2×10⁶IU青霉素，8×10⁵-1.2×10⁶IU鏈霉素，1-5%甘油，1-5%DMF，1-5%乙二醇，18-25%蛋黃，加蒸餾水稀釋到1L，混勻后消毒。

步驟三凍存精液：

1）收集精子活率在75％以上的精液，離心去上清后加入37℃預熱的與精子等體積的A液，放入裝有37℃水的燒杯中，置于17℃恒溫箱中平衡2h；

2）取出再離心去上清后加入17℃預熱的B液，放入裝有17℃水的燒杯中，置于4℃冰箱中平衡2h；

3）將平衡好的B精液混合液裝入0.25ml冷凍細管中，放入程序降溫儀中，從4℃開始，1℃/min，降到-6℃，取出，置于液氮上熏蒸15min，裝袋置于液氮罐中凍存。

優選為，步驟一制備A液：

將50g葡萄糖，1.5g乙二胺四乙酸，4g二水檸檬酸鈉，1g碳酸氫鈉，0.1g氯化鉀，1×10⁶IU青霉素，1×10⁶IU鏈霉素，加蒸餾水稀釋到1L，混勻后消毒。

步驟二制備B液：