[發明專利]一種同時檢測煙草中生物堿及亞硝胺的方法

有效

• 申請號: 201310171282.7
• 申請日: 2013-05-10
• 公開（公告）號: CN103257196A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 李勇;逄濤;師君麗;孔光輝;吳玉萍
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 姜開俠

技術領域

本發明屬于煙草化學成分檢測技術領域，具體涉及一種操作簡便、重現性好、分析靈敏度高、定量準確，并能夠同時檢測煙草中生物堿及亞硝胺的方法。?

背景技術

我國是卷煙的生產與消費大國，吸煙人數和卷煙消費量分別占世界吸煙人數和卷煙消費量的三分之一，卷煙作為一種特殊的商品，在我國國民經濟中占有相當重要的地位。隨著吸煙與健康問題的直接關系受到人們越來越多的關注，吸煙有害健康已是不容置喙的事實。煙草中生物堿類化合物和煙草特有亞硝胺類化合物一直是煙草化學研究領域的重點。由于煙草生物堿特別是尼古丁對煙草的吸食口味和勁頭有明顯的作用，而一直被用作煙葉質量的評價指標。然而，煙草生物堿也是煙草特有亞硝胺的直接前體物之一，煙草特有亞硝胺是煙草生物堿在調制和陳化過程中產生的一類具有潛在致癌性的化合物。具體而言，生物堿在煙草調制、陳化和卷煙燃吸的過程中易代謝為降生物堿，從而與亞硝酸鹽形成有致癌性的煙草特有亞硝胺，后者的含量是煙草安全質量的重要評價指標。因此，同時分析煙草中生物堿及亞硝胺類物質的含量，不僅對研究這兩類化合物在煙草中的分布規律以及生物堿向亞硝胺的轉化規律具有十分重要的意義，而在此基礎上，對于進一步控制和降低卷煙煙氣中的有害成分，提高卷煙品質，減少煙草有害物對吸煙者及被動吸煙者的健康所造成的損傷，更具有十分現實的作用。?

在以往的實踐中，研究者主要采用以下方法對煙草中的有害物進行定量分析：分光光度法檢測靈敏度高，反應專性強而且快速簡便，擅長測定卷煙和卷煙煙氣中各種亞硝胺的表觀總量，但是NOBr在吹出過程中會分解成為NO而導致亞硝胺的表觀總量偏低，而且制樣也非常繁瑣。氣相色譜-熱能分析法能同時定量檢測煙草特有亞硝胺和揮發性亞硝胺，用于常規分析煙草及相關產品和環境煙氣。實驗中發現，二甲基亞硝胺與N-亞硝基降煙堿等亞硝胺在緩沖液、劍橋濾片等回收方法中的回收率接近，但是在主流和側流煙氣中的含量變化卻很大：揮發性亞硝胺相差2~80倍，而煙草特有亞硝胺相差2~11倍。氣相色譜-氮磷檢測法改進了煙氣捕集方法，優化了試樣前處理技術和色譜分離條件，其樣品回收率在84%~93%之間，相對標準偏差在6%~15%之間。此外，還有氣相色譜-質譜法等等。但總的來說，由于煙草特有亞硝胺不易揮發，在對煙葉等樣品進行氣相色譜分析時，所采用的汽化溫度和柱溫均較高，易造成分析結果的偏差，同時氣相色譜對樣品的前處理要求高，純化步驟多，分析周期也稍長。?

煙草生物堿的定量分析主要有重量分析法、滴定分析法、光分析法、電分析法和色譜分析法等等，基于煙葉、煙絲和煙氣成分的復雜性，對其中煙堿及其代謝物的分析，色譜分析法是更為合適的選擇，能夠把煙堿和與其共存的生物堿組分分離開，并準確、快速地進行定性、定量。但仍存在許多需要改進的地方：如不能確保煙草生物堿各個組分盡可能的提取完全和對含量極低的麥斯明檢測效果不理想，以及煙草生物堿定量中，標準曲線的溶液配制需分開進行以降低干擾等。就目前的研究現狀來看，我國對煙草中生物堿及亞硝胺類物質的組成含量研究還不系統，還需要進一步優化提取分離技術和測定方法的相關技術參數，更重要的是，目前我國尚無一種能夠同時檢測煙草中生物堿和亞硝胺類物質的方法見諸報道。?

發明內容

為了彌補現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種同時檢測煙草中生物堿及亞硝胺的方法。?

本發明的目的是這樣實現的：?

一種同時檢測煙草中生物堿及亞硝胺的方法，包括樣本萃取、凈化、分析、定量工序，具體包括：

A、萃取：在煙葉粉末中加入內標溶液和去超純水，超聲萃取；

B、凈化：將萃取液過0.22μm濾膜后，加入甲醇，振搖后離心；

C：分析：取上清液進樣分析；

分析所用色譜柱為Water?BEH?C18（2.1mm×50mm×1.7μm），柱溫為30~40℃，流動相A為0.2mmol/L的乙酸銨水溶液，流動相B為0.2mmol/L的乙酸銨甲醇溶液，流動相梯度為100%A0%B保持0~1min，40%A60%B保持1~2.1min，0%A100%B保持2.1~3min，100%A0%B保持3~4min，流速0.6ml/min；

離子源為電噴霧電離源，掃描方式為正離子掃描，電噴霧電壓為4000v，離子源溫度為750℃，離子源氣體1為氮氣，壓力70psi，氣體2為氮氣，壓力50psi；