[發明專利]一種同時檢測煙草中生物堿及亞硝胺的方法

有效

• 申請號: 201310171282.7
• 申請日: 2013-05-10
• 公開（公告）號: CN103257196A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 李勇;逄濤;師君麗;孔光輝;吳玉萍
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 昆明知道專利事務所(特殊普通合伙企業) 53116
• 代理人: 姜開俠

1.一種同時檢測煙草中生物堿及亞硝胺的方法，其特征在于包括樣本萃取、凈化、分析、定量工序，具體包括：

A、萃?。涸跓熑~粉末中加入內標溶液和去超純水，超聲萃?。?/p>

B、凈化：將萃取液過0.22μm濾膜后，加入甲醇，振搖后離心；

C：分析：取上清液進樣分析；

分析所用色譜柱為Water?BEH?C18（2.1mm×50mm×1.7μm），柱溫為30~40℃，流動相A為0.2mmol/L的乙酸銨水溶液，流動相B為0.2mmol/L的乙酸銨甲醇溶液，流動相梯度為100%A0%B保持0~1min，40%A60%B保持1~2.1min，0%A100%B保持2.1~3min，100%A0%B保持3~4min，流速0.6ml/min；

離子源為電噴霧電離源，掃描方式為正離子掃描，電噴霧電壓為4000v，離子源溫度為750℃，離子源氣體1為氮氣，壓力70psi，氣體2為氮氣，壓力50psi；

D、定量：采用混合配置法制備不同濃度梯度的待測化合物標準溶液，分別對各濃度的標準溶液進行液相色譜-質譜分析，繪制化合物儀器響應對實際濃度的標準曲線，并擬合曲線方程，將待測化合物的儀器響應代入標準曲線擬合方程，即可求得待測化合物的檢測濃度，根據下述公式計算煙草樣品中待測化合物的實際濃度：

?式中，c為煙草樣品中生物堿或亞硝胺的含量，單位μg/g；x為儀器測得的萃取液的濃度，單位為μg/ml。

2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述煙葉粉末的用量為90~110mg。

3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述內標溶液的用量為0.9~1.1ml。

4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述內標溶液的濃度為1μg/ml，分別含有D4-NNN、D4-NAT、D4-NAB和D4-NNK。

5.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述去超純水的用量為8.9~9.1ml。

6.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述去超純水的電阻≥18MΩ。

7.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述超聲萃取是在20Hz的頻率下萃取18~22min。

8.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述萃取液過濾膜后，取450~550μl至微量離心管備用。

9.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述甲醇的用量為0.9~1.1ml。

10.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述離心是在8000~10000r/min的速度下離心3~5min。