[發明專利]一種抗CD20單克隆抗體-海兔毒素偶聯物及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 201310170344.2 | 申請日： | 2013-05-08 |
| 公開（公告）號： | CN103254317A | 公開（公告）日： | 2013-08-21 |
| 發明（設計）人： | 陳樞青;李朝輝;張騫;徐曉倩 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C07K1/107;A61K38/07;A61K47/48;A61P35/00 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 馬士林 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 cd20 單克隆抗體 海兔 毒素 偶聯物 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種抗CD20單克隆抗體-海兔毒素偶聯物的制備方法，包括：
（1）將抗CD20單克隆抗體溶于緩沖液中，加入三氯乙基磷酸酯，進行還原反應；
（2）將被還原的抗CD20單克隆抗體與帶連接臂的海兔毒素混合，進行偶聯反應；
（3）反應完成后，分離純化得到所述抗CD20單克隆抗體-海兔毒素偶聯物。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述抗CD20單克隆抗體為Ofatumumab單抗。
3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，三氯乙基磷酸酯與抗CD20單克隆抗體的摩爾比為5.5～10:1。
4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述還原反應的條件為：25～37℃水浴反應1～3h。
5.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述連接臂為馬來酰亞胺修飾的纈氨酸-瓜氨酸二肽。
6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述偶聯反應的溫度為4℃以下，時間為30～60min。
7.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述分離純化的方法為：利用脫鹽柱除去反應液中分子量小于2kDa的物質，將所得抗體流出液過濾除菌，即為所述抗CD20單克隆抗體-海兔毒素偶聯物。
8.如權利要求1～7任一所述的制備方法獲得的抗CD20單克隆抗體-海兔毒素偶聯物。
9.如權利要求8所述的抗CD20單克隆抗體-海兔毒素偶聯物，其特征在于，每個抗CD20單克隆抗體分子偶聯3～8個海兔毒素分子。
10.如權利要求9所述的抗CD20單克隆抗體-海兔毒素偶聯物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
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