[發明專利]用于自動免疫熒光檢測的流式血球儀通道及其使用方法

有效

• 申請號: 201310167348.5
• 申請日: 2013-05-08
• 公開（公告）號: CN103308669A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 石軍;章菁;侯旻;胡潔;谷朝臣
• 申請（專利權）人: 上海市第六人民醫院;上海交通大學
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

技術領域

本發明涉及免疫組化、光學、機械電子、統計數學，具體是一種用于流式血球儀的自動免疫熒光檢測通道及其使用方法。

背景技術

目前市場上五分類血球儀，如Sysmex?XE-5000除了采用傳統的電阻抗法和射頻法外，逐步應用了流式細胞技術，并采用免疫熒光技術，逐步實現了對某些特異性細胞的檢測，如外周血造血干細胞。但是，目前的免疫熒光檢測并未實現自動化檢測，而是人工進行稀釋、溶血、孵育和反復離心洗滌等工作，過程費時且操作繁重。因此，實現免疫熒光細胞的自動化檢測，對縮短檢測時間，推廣臨床應用，具有重要意義。

發明內容

本發明針對上述需求以及現有技術中存在的不足，提供了一種流式血球儀的自動免疫熒光檢測通道及其使用方法。

根據本發明的一個方面，提供一種用于自動免疫熒光檢測的流式血球儀通道，包括依次連接的閥門a、血稀釋模塊、閥門b、溶血模塊、閥門c、離心洗滌模塊，還包括閥門e、自動孵育模塊、閥門d、閥門f、流式檢測模塊，其中：

離心洗滌模塊包括離心振蕩臺、重懸液加注針頭、上清液汲取針頭、上清夜汲取器、重懸液加注器、樣本汲取針頭，上清夜汲取器通過上清液汲取針頭連接離心振蕩臺，重懸液加注器通過重懸液加注針頭連接離心振蕩臺，離心振蕩臺連接樣本汲取針頭的一端，樣本汲取針頭的另一端依次通過閥門e、自動孵育模塊、閥門d連接回離心振蕩臺，并且，樣本汲取針頭的另一端通過閥門f連接至流式檢測模塊；

血稀釋模塊用于對血樣進行檢測前的抗凝和稀釋；

溶血模塊具有紅細胞裂解液加注口，并包含有振動混勻裝置；

離心洗滌模塊用于對樣本進行洗滌純化；

自動孵育模塊具有抗體加注口，采用懸滴方式加注抗體，并包含有振動混勻和溫控裝置；

流式檢測模塊具有濾色片組，用于針對不同的熒光試劑進行濾光切換，以對最終樣本進行檢測。

優選地，還包括控制模塊和統計分析模塊，其中，控制模塊用于對閥門a、血稀釋模塊、閥門b、溶血模塊、閥門c、離心洗滌模塊、閥門e、自動孵育模塊、閥門d、閥門f、流式檢測模塊的運轉進行控制和檢測，統計分析模塊用于對流式檢測模塊采集到的光電信號進行處理，獲得熒光免疫細胞的密度、體積參數。

優選地，離心洗滌模塊能夠進行回轉離心運動和微振蕩混勻運動。

優選地，離心振蕩臺包括偏心振動輪和分離重懸管，其中，分離重懸管固定在偏心振動輪上，通過偏心振動輪旋轉產生振動，保證重懸的效果。

優選地，離心振蕩臺的分離重懸管的底端設有凹槽，以容留樣本沉淀，保證上清液汲取過程中不丟失樣本。

優選地，離心振蕩臺的分離重懸管與重懸液加注口、上清液汲取針頭、樣本汲取針頭按照需求進行工位對齊，保證分離、洗滌、重懸的進行。

根據本發明的另一個方面，還提供一種所述用于自動免疫熒光檢測的流式血球儀通道的使用方法，包括如下步驟：

步驟1，打開閥門a，外周血血樣進入血稀釋模塊，對血樣加注抗凝劑、稀釋液并振蕩混勻，進行抗凝和稀釋；

步驟2，打開閥門b，血樣進入溶血模塊，對抗凝稀釋后樣本加注溶血劑進行溶血，自動混勻后自動保持若干分鐘作為裂解時間；

步驟3，打開閥門c，血樣進入離心洗滌模塊對溶血后樣本重復進行離心分離、上清液汲取、重懸稀釋、振動混勻步驟若干遍；

步驟4，樣本汲取針頭汲取樣本，通過閥門e送入自動孵育模塊，洗滌純化的溶血樣本進行樣本熒光素加注和自動孵育；

步驟5，打開閥門d，完成單獨清潔沖刷后的離心洗滌模塊對孵育后樣本進行離心分離、上清液汲取、重懸稀釋、振動混勻步驟若干遍；

步驟6，樣本汲取針頭汲取洗滌后孵育樣本，通過閥門f送入流式檢測模塊，流式檢測模塊對最終樣本進行檢測；

步驟7，統計分析模塊對PMT得到的識別結果與外周血血常規結果整合。

步驟8，對整個檢測通道中的液路進行清潔，反向沖刷若干遍。

優選地，在步驟1中，外周血稀釋倍數為10-100倍。

優選地，在步驟4中，孵育溫度為30-40攝氏度，孵育時間為10-15分鐘，熒光素為FITC。

優選地，在步驟6中，流式檢測模塊采用的激光波長為488nm，流式檢測模塊包含的熒光探測器為PMT。

與現有技術相比，本發明的優勢在于，可以實現血常規和特異性細胞，如外周血造血干細胞等的自動化聯合檢測，降低造血干細胞檢測的費用，增加了檢測的實時性，擴展了血球儀的檢測功能。

附圖說明