[發(fā)明專利]精品肝素和制備精品肝素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310165701.6
• 申請日: 2013-05-08
• 公開（公告）號(hào): CN104140478B
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邢新會(huì);吳敬君;張翀
• 申請（專利權(quán)）人: 清華大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/10
• 分類號(hào): C08B37/10
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所11105
• 代理人: 閆桑田

1.一種制備精品肝素的方法，其包括：

向含半乳糖胺雜質(zhì)的粗品肝素溶液中加入硫酸軟骨素酶AC、硫酸軟骨素酶B或其混合物處理兩次，與半乳糖胺雜質(zhì)進(jìn)行酶反應(yīng)，其中所述半乳糖胺雜質(zhì)包括硫酸皮膚素、硫酸軟骨素和軟骨素；

其中所述方法還包括下列的提純步驟：

除雜質(zhì)步驟，該除雜質(zhì)步驟包括乙醇沉淀步驟、氧化步驟；

冷凍干燥；

其中，所述硫酸軟骨素酶AC是與MBP融合的硫酸軟骨素酶AC；所述硫酸軟骨素酶B是與MBP融合的硫酸軟骨素酶B。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述與MBP融合的硫酸軟骨素酶AC為具有SEQ ID NO:1的MBP-ChonAC；所述與MBP融合的硫酸軟骨素酶B為具有SEQ ID NO:2的MBP-ChonB。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中向肝素溶液中添加胰酶停止酶反應(yīng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述除雜質(zhì)步驟重復(fù)進(jìn)行兩次或三次以上。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，在最后一次乙醇沉淀步驟之前進(jìn)行氧化并脫色。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，除雜質(zhì)步驟包括向肝素溶液中添加氯化鈣以除去雜質(zhì)，并進(jìn)一步添加無水碳酸鈉以除去鈣離子。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，利用H₂O₂對肝素溶液進(jìn)行氧化并脫色。

8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的方法，其中，

所述硫酸軟骨素酶AC和粗品肝素的比例為：300IU-30000IU硫酸軟骨素酶AC/kg粗品肝素；或硫酸軟骨素酶B和粗品肝素的比例為500IU-50000IU硫酸軟骨素酶B/kg粗品肝素。

9.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的方法，其中，

所述硫酸軟骨素酶AC和粗品肝素的比例為：1000IU-15000IU硫酸軟骨素酶AC/kg粗品肝素；或硫酸軟骨素酶B和粗品肝素的比例為1000IU-20000IU硫酸軟骨素酶B/kg粗品肝素。

10.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述硫酸軟骨素酶AC和粗品肝素的比例為：2000IU-10000IU硫酸軟骨素酶AC/kg粗品肝素；或硫酸軟骨素酶B和粗品肝素的比例為3000IU-12000IU硫酸軟骨素酶B/kg粗品肝素。

11.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述硫酸軟骨素酶AC和粗品肝素的比例為：3000IU-6000IU硫酸軟骨素酶AC/kg粗品肝素；或硫酸軟骨素酶B和粗品肝素的比例為5000IU-10000IU硫酸軟骨素酶B/kg粗品肝素。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，獲得所述粗品肝素的肝素原料為來自動(dòng)物組織的含有肝素的原料。

13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，獲得所述粗品肝素的肝素原料為來源于豬、牛、羊組織的肝素。

14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，獲得所述粗品肝素的肝素原料為來源于豬小腸粘膜的肝素。