[發明專利]紅豆杉中抗癌成分的綠色分離及結構方法

無效

• 申請號: 201310161158.2
• 申請日: 2013-05-03
• 公開（公告）號: CN104130219A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 徐燕鋒
• 申請（專利權）人: 徐燕鋒
• 主分類號: C07D305/14
• 分類號: C07D305/14;C07H17/04;C07H1/08
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明以紅豆杉枝葉為原料，對紫杉醇及其它三種紫杉烷的提取、分離及結構修飾進行了研究。

背景技術

目前，在紫杉醇及其它紫杉烷類化合物的提取分離、半合成研究中，研究最多的是從紅豆杉植物中提取和分離紫杉醇。而對其它紫杉烷類化合物只進行了結構鑒定，并未進行深入研究。其中，提取方法報道的最多，幾乎所有的提取方法均被用于紫杉烷的提取研究中，包括溶劑冷浸法，熱回流法、索氏提取法等傳統方法，以及后出現的超優勢，但僅限于實驗室研究，難以實現工業化生產。

此外，對紫杉烷類化合物的分離方法主要集中在萃取、硅膠柱層析、固相萃取和樹脂吸附分離等幾個方面，但是這些方法分別具有分離選擇性差、使用有毒試劑、成本昂貴和分離效率低等制約性因素。在紫杉醇的研究領域中，美國最早發現并分離得到紫杉醇，對紫杉烷類化合物的研究起步最早，工藝和理論水平較為領先。對該類產品的推廣使用普及率較高。無論是在提取分離方面、化學合成方面還是在抗癌活性方面，美國無疑是研究最早、最深入的國家。在1994年，美國科學家R.A.Holton和K.C.Nicolaou幾乎同時宣布成功地合成了紫杉醇。然而，由于全合成步驟多、收率低、成本高等諸多限制因素，難以實現工業化生產，沒有從根本上解決紫杉醇臨床藥源的問題。

我國擁有接近世界50％以上的紅豆杉資源儲量，從全球范圍看，雖然紅豆杉在美國、加拿大、法國、印度及中國都有分布，但亞洲的紅豆杉儲量最多。其中，在全球的11個品種中中國就有5種。雖然我國的紅豆杉資源豐富，但對紫杉醇的規摸性提取發展較晚，直到90年代才開始。而且主要是為發達國家的臨床用紫杉醇提供原料藥，工藝水平薄弱，理論尚不完善。在實際應用中，生產規模小，市場普及率低。對資源利用造成了很嚴重的浪費、難以實現最大附加值。因此，從大規模工業生產和市場推廣應用的現實角度長遠考慮，生產工藝的環保化、低成本化與資源的合理利用顯得尤為重要。總之，目前世界范圍內對紫杉醇的需求仍是供不應求的，而臨床用紫杉醇主要是通過植物提取和化學半合成而來。因此，對紫杉醇的提取分離、以及將其它在紅豆杉中含量較大的紫杉醇類似物轉化成為紫杉醇或者多西紫杉醇進行深入研究，不僅可以提高我國紫杉醇的發展步伐，增加農民收入，而且可以從很大程度上，為臨床提供紫杉醇用藥，為更多癌癥患者解決藥源缺少的問題。

發明內容

針對上述存在的問題，本發明的目的是實現一種紅豆杉中抗癌成分的綠色分離及結構方法，利用樹脂柱層析技術對紅豆杉中紫杉醇等四種紫杉烷進行綠色高效分離，并采用結構修飾將傳統工藝中被廢棄的其他三種紫杉烷轉化為抗癌藥物紫杉醇或多西紫杉醇，增加了資源利用率。內容包括：利用樹脂層析法對紅豆杉粗提物中包括紫杉醇在內的四種紫杉烷類化合物進行快速高效的分離；采用正相-反相硅膠柱層析技術對四種紫杉烷進行進一步的純化；將其它三種紫杉烷類物質通過系列結構修飾合成多西紫杉醇或紫杉醇。

本發明的目的是通過下述技術方案實現的：

本發明以東北紅豆杉枝葉為原料，對抗癌藥物紫杉醇及其它三種重要的紫杉烷類化合物——10-脫乙酰基巴卡亭III、7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇和三尖杉寧堿的提取、分離、純化工藝進行了研究。在分離過程中，采用了新型樹脂層析法對四種物質進行了高效快速的分離。并將10-脫乙酰基巴卡亭III、7-木糖基-10-去乙酰基紫杉醇和三尖杉寧堿通過化學手段進行了結構改造，合成了抗癌藥物紫杉醇和多紫杉醇，并得出以下結論：

一、確立了用于四種紫杉烷類物質定性和定量檢測的HPLC條件：色譜柱Curosil-PFP?5μ(4.6mm×250mm)，檢測波長234nm，流速1mL/min，進樣量10μL，流動相為1-17min乙腈-水(25/75)，18-58min乙腈-水(37/63)體系，柱溫保持為35℃。結果表明，在此色譜條件下對四種紫杉烷類物質進行檢測，精密度高，重現性好，準確度高，適用于紅豆杉及其他制劑中四種紫杉烷類化合物的質量分析檢驗。

二、確立了東北紅豆杉枝葉中四種紫杉烷類化合物的最佳提取工藝參數：提取方法為超聲提取；提取溶劑為80％乙醇溶液；提取固液比為1∶30；提取時間為30min；提取次數為3次。

三、確立了一種簡單、成本低廉的循環分離與富集四種紫杉烷類化合物的樹脂層析法：分別用30％、45％及60％的乙醇溶液進行梯度洗脫，所用體積分別為：20BV、30BV、10BV；流速為6BV/h；