[發明專利]針對胱抑素C的單克隆抗體、雜交瘤細胞株制備及其用途

有效

• 申請號: 201310153514.6
• 申請日: 2013-04-27
• 公開（公告）號: CN104119440B
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 孫兵;張瑾;邊超;凌志洋;伊春艷
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C07K16/38
• 分類號: C07K16/38;C12N5/20;G01N33/68;C12R1/91
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司31266
• 代理人: 祝蓮君,雷芳

技術領域

本發明涉及檢測領域，尤其涉及針對胱抑素C的單克隆抗體、雜交瘤細胞株制備及其用途。

背景技術

隨著生活水平的提高和生活節奏的加快，人們的生活方式、飲食結構近年來均發生了很大變化。在這種改變的影響下，腎臟疾病的發病率逐年增加，已成為威脅世界公共健康的最主要疾病之一。正常人群腎病發病率約6.1-10%，我國約有1億腎病患者。腎臟作為人體主要的代謝和排泄器官之一，體內大部分物質要經過腎小球濾過和腎小管重吸收的作用。早期診斷是實現腎臟疾病早期治療的關鍵，在腎臟疾病的發生早期，可以通過尿液中生物標志物蛋白含量的檢測確定疾病發生的部位及程度。

胱抑素C(Cystatin C,Cys C)屬于半胱氨酸蛋白酶抑制劑超家族的成員之一，位于人類第20號染色體，是由120個氨基酸組成的非糖基化蛋白，分子量13.3KDa。Cys C廣泛存在于人類的體液中，特別是在腦脊液和精液中濃度最高。所有的有核細胞均可產生，生成速度穩定，不受炎癥、膽紅素、溶血、甘油三酯的影響，且與性別、年齡、肌肉量無關。

胱抑素C是近年來發現被廣泛運用于臨床的腎臟功能評價指標，由于其血清濃度與腎小球濾過率密切相關[Royakkers AA,van Suijlen JD,Hofstra LS,Kuiper MA,Bouman CS,Spronk PE,Schultz MJ:Serum cystatin C–A useful endogenous marker of renal function in intensive care unit patients at risk for or with acute renal failure?Curr Med Chem2007;14:2314–2317.]，因此其作為腎小球濾過功能指標的臨床診斷價值已得到充分肯定。因胱抑素C在體內代謝途徑，有人嘗試研究尿液胱抑素C對于腎臟疾病診斷的臨床意義，近年來已有大量文獻相繼報道了尿液胱抑素C作為腎臟損傷的標志物之一，在不同類型腎臟疾病診斷中的評價及應用突顯了該指標的診斷價值。2002年FDA網上公布了26個在檢驗醫學有重大突破的全新檢測項目，血清CysC測定便是其中之一。2008年美國食品藥品監督管理局(FDA)和歐洲藥品管理局(EMEA)也把尿液胱抑素C列為七個反映腎損傷的生物標志物之一[Frank D.et al.Urinary clusterin,cystatin C,β2-microglobulin and total protein as markers to detect drug-induced kidney injury,Nature Biotechnology,2010(28):463–469.]。

特定的結合反應，例如抗原-抗體反應，己經廣泛用于檢測生物樣品中存在的各種物質的免疫測試中。常用的技術包括酶聯免疫吸附分析(ELISA)和膠體金免疫層析等。

酶聯免疫吸附實驗(Enzyme-Linked ImmunoadSorbent Assay，ELISA)是一種敏感性高、特異性強、重復性好的免疫學檢測方法，其試劑穩定、易保存、操作簡便、結果判斷較客觀，既可以做定性研究也可以做定量分析。其中，具備針對所檢測目標的單克隆抗體是ELISA實驗，尤其是雙抗夾心法ELISA實驗能否開展的關鍵條件。ELISA對目標抗原檢測的靈敏度、特異性主要取決于其中所應用的抗體的性質和質量。

膠體金免疫層析技術是近年來發展起來的一種獨特的免疫診斷技術，具有免疫反應和色譜層析的特定，與GC-MS比較，膠體金層析技術具有特異性強、靈敏度高、簡單快速、易于操作、結果容易判讀、無需任何儀器設各等優點。

雖然本領域雖然有一些檢測檢測胱抑素C的方法，因此其靈敏度和準確度還難以令人滿意。因此本領域急需開發準確、特異性強、快速、靈敏地檢測胱抑素C的抗體(尤其是可成對使用的單克隆抗體)和方法。

發明內容

本發明的目的是提供提供一種制備胱抑素C單克隆抗體方法和具有分泌抗胱抑素C單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

本發明的另一目的是提供檢測胱抑素C的免疫檢測試劑、免疫檢測板和試劑盒。

在本發明的第一方面，提供了一種胱抑素C單克隆抗體，所述的抗體與胱抑素C親和力為1.0×10^-10M至2.0×10^-9M。

在另一優選例中，所述的抗體由雜交瘤細胞株S-56-14CCTCC NO:C201334、或S-386-12CCTCC NO:C201335產生。