[發明專利]一種急性淋巴母細胞白血病多藥耐藥細胞株

有效

• 申請號: 201310148717.6
• 申請日: 2013-04-25
• 公開（公告）號: CN103224909A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 南京凱基生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于細胞工程技術領域，涉及一種人類細胞株，具體涉及一種急性淋巴母細胞白血病多藥耐藥細胞株及其建立方法與應用。

背景技術

急性淋巴母細胞白血病是造血系統常見惡性腫瘤，化療為其主要的治療手段。雖然新的化療藥物、多藥聯合的強烈化療方案的應用以及造血干細胞移植的開展已使急性白血病的預后獲得很大改善，但難治、復發仍然是白血病治療中的現實問題。研究表明，多藥耐藥是導致多數白血病患者化療失敗的根本原因。多藥耐藥性（MDR）是指對一種藥物具有耐藥性的同時，對其他結構不同，作用靶點不同的抗腫瘤藥物也具有耐藥性。急性淋巴母細胞白血病多藥耐藥是指白血病細胞在接觸一種抗腫瘤藥物之后，產生了對多種結構不同、作用機制各異的其它抗腫瘤藥物產生耐藥性。因此，白血病多藥耐藥的機制、臨床意義及耐藥逆轉成為腫瘤研究中的熱點之一，建立實驗需要的白血病耐藥細胞模型更具有重要的研究意義。

腫瘤細胞耐藥株的建立方法通常有兩種，一是逐步增加藥物濃度、持續誘導法，二是大劑量沖擊法。本發明結合兩種方法，前期誘導采用大劑量沖擊法，后期誘導采用持續誘導法。通過耐藥細胞株的建立可以進一步構建體內外腫瘤耐藥模型，從而深入研究MDR耐藥機制，甚至發現其他新的耐藥機制。通過耐藥細胞株的建立的體內外腫瘤耐藥模型，可以用于抗腫瘤藥物的篩選。目前，尚沒有發現關于用于藥物篩選用的急性淋巴母細胞白血病多藥耐藥細胞株的報道。

發明內容

鑒于現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種急性淋巴母細胞白血病多藥耐藥細胞株及其建立方法。本發明的細胞株具有典型多藥耐藥特性，為進一步研究耐藥逆轉途徑提供了實驗基礎。

本發明的目的是這樣實現的：

本發明采用急性淋巴母細胞白血病細胞株MOLT-4為誘導對象，前期采用大劑量沖擊法，后期采用逐步遞增5-FU濃度、間歇作用的體外誘導法，建立了急性淋巴母細胞白血病多藥耐藥細胞株MOLT-4/FU。該細胞株已經于2012年12月24日中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC?NO.7053。該耐藥株構建體內外腫瘤耐藥模型，從而實現療效更好的抗癌藥物的篩選。

具體地，本發明涉及的急性淋巴母細胞白血病多藥耐藥細胞株MOLT-4/FU是按照如下方法建立獲得：

（1）人急性淋巴母細胞白血病細胞株MOLT-4用培養液(含10％小牛血清的RPMI-1640培養液)，5％CO2，37℃條件下，培養至70％～90％貼壁率時，棄上清，加入氟尿嘧啶1000ng/ml沖擊培養1小時，棄氟尿嘧啶1000ng/ml培養液，空白RPMI-1640培養液洗滌2次后，更換增殖培養液培養72-96h擴增存活細胞。至存活細胞擴增至70％～90％貼壁率時，再重復用氟尿嘧啶1000ng/ml培養液沖擊培養1小時9次，即總共完成10次氟尿嘧啶1000ng/ml紫杉醇培養液沖擊培養1小時，進一步以此細胞為基礎，1000ng/ml持續培養7天。

（2）重復上述操作，將篩選條件依次改為氟尿嘧啶1000ng/ml、2000ng/ml、5000ng/ml、10000ng/ml、20000ng/ml培養液。

本發明通過細胞形態學觀察、生長曲線和群體倍增時間測定、藥物敏感試驗、細胞內Rh-123研究及MDR1、MRP和細胞周期的測定，評價急性淋巴母細胞白血病多藥耐藥細胞株MOLT-4/FU的生物學特性，結果成功建立了MOLT-4/FU耐藥株，耐藥指數為34.609，對依托泊苷（VP16）、順鉑（cDPP）、紫杉醇（Taxol）、長春新堿（YCR）和阿霉素（Adr）產生了明顯的交叉耐藥性。

附圖說明

圖1為MOLT-4、MOLT-4/FU的細胞生長曲線圖。

圖2為MOLT-4的細胞周期圖。

圖3為MOLT-4/FU的細胞周期圖。

圖4為羅丹明123在MOLT-4細胞內的含量圖。

圖5為羅丹明123在MOLT-4/FU細胞內的含量圖。

圖6為本發明MOLT-4/FU細胞株的顯微圖。

具體實施方式

下面通過實施例進一步說明本發明。本發明的實施例僅僅是用于說明本發明，而不是對本發明的限制，在本發明的構思前提下對本發明方法的簡單改進都屬于本發明要求保護的范圍。

實施例1急性淋巴母細胞白血病多藥耐藥細胞株MOLT-4/FU的誘導建立