[發(fā)明專利]基于DNA自組裝的非酶SNP檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310145787.6 | 申請日： | 2013-04-24 |
| 公開（公告）號： | CN103290111A | 公開（公告）日： | 2013-09-11 |
| 發(fā)明（設計）人： | 曾令文;吳薇;陳俊華 | 申請（專利權）人： | 中國科學院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205 | 代理人： | 方振昌 |
| 地址： | 510530 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 dna 組裝 snp 檢測 方法 | ||
1.基于DNA自組裝的非酶檢測SNP?的方法，包括如下步驟：
1）設計分離捕獲探針CP、單鏈MP、探針AP1和AP2，其中：
CP和MP可分別和目標序列的5’端和3’端互補為雙鏈，在形成的雙鏈中，CP和MP之間存在單鏈缺刻，該單鏈缺刻左側(cè)或右側(cè)的核苷酸與目標序列的SNP位點互補；
CP的一個末端連接有分離標記；
自組裝AP1的5’端和3’端可分別和AP2的3’端和5’端互補，自組裝形成雙鏈DNA，AP1和AP2的5’端和3’端中至少部分序列可與MP的一端互補為雙鏈；
2）將CP、MP、核酸連接酶和樣本加入反應液中，混勻，反應完全；
3）將反應液中生成的雙鏈DNA解鏈為單鏈DNA；
4）將連接有分離標記的單鏈DNA分離，清洗去除其他游離DNA鏈；
5）將清洗后的帶分離標記的單鏈DNA、AP1、AP2加入反應液，反應完全以形成自組裝雙鏈；
6）將連接有分離標記的DNA鏈分離，清洗去除其他游離DNA鏈；
7）通過檢測清洗后的DNA鏈中雙鏈DNA的量，確定SNP的量。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：CP和MP的長度獨立為15～30bp。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于：AP1和和AP2的長度獨立為20～50?bp。
4.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于：分離標記為親合基團、固相載體。
5.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于：核酸連接酶選自?T4?DNA連接酶、E.coli?DNA連接酶、Tsc?DNA連接酶。
6.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于：將清洗后的DNA鏈與特異性嵌入雙鏈DNA中的熒光染料反應，之后檢測其熒光值確定雙鏈DNA的量。
7.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于：通過加熱之后急冷將雙鏈DNA解鏈為單鏈DNA。
8.實現(xiàn)權利要求1～7任意一項權利要求所述方法的檢測試劑盒。
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