[發明專利]用于鑒別乳腺肌上皮病變的多重染色試劑及其檢測方法

無效

• 申請號: 201310135248.4
• 申請日: 2013-04-18
• 公開（公告）號: CN103196731A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 王剛平
• 申請（專利權）人: 王剛平
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.用于鑒別乳腺肌上皮病變的多重染色試劑，其特征在于該多重染色試劑由以下重量份的抗體組成：鼠抗人CK8/18?免疫組化單克隆抗體20%、即用型鈣調節蛋白鼠抗人單克隆抗體20%、即用型細胞角蛋白鼠抗人單克隆抗體20%、即用型P63蛋白鼠抗人單克隆抗體20%、肌動蛋白HHF-35鼠抗人單克隆抗體20%，其制作方法是分別等量吸取上述各組分抗體，然后進行混合，在旋渦混合器上旋轉混勻或者吸管吹打混勻即可，并置4℃冰箱內保存備用。

2.用于鑒別乳腺肌上皮病變的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：步驟一、把采集的乳腺肌上皮組織經過脫水、透明及浸蠟后，進行石蠟包埋后，進行切片，厚度為3-5um，對疑有病變的組織選作免疫標記，在溫度為58℃-60℃下，放到恒溫箱內烤切片2-3小時，切片上的石蠟經過脫蠟、水化后，用TBS液沖洗切片3次，每次3分鐘；步驟二、將切片經內源性過氧化物酶阻斷，用濃度為3%的新鮮配制的過氧化氫孵育切片5分鐘，然后用蒸餾水沖洗切片2次，每次3分鐘；步驟三、用EDTA修復液對切片進行抗原修復；步驟四、向切片加非免疫動物血清，室溫下孵育切片10分鐘；步驟五、除去切片上的非免疫動物血清，向切片加多重染色試劑，在17℃—33℃溫度下孵育切片30-60分鐘；步驟六、加使MACH?2?Double?Stain酶標二抗試劑，室溫孵育切片30分鐘，用TBS液沖洗切片3次，每次3分鐘，再用蒸餾水沖洗2次，每次3分鐘；步驟七、除去切片上的蒸餾水后，加AP-red顯色劑室溫孵育切片10-20分鐘，用蒸餾水沖洗2次，每次3分鐘，在顯微鏡下觀察，掌握染色時間，陽性信號為紅色，觀察完成后，用TBS液沖洗切片3次，每次3分鐘，再用蒸餾水沖洗2次，每次3分鐘，然后采用pH值為2.0，濃度為0.05%?HCl室溫孵育切片30?分鐘，用TBS液沖洗切片2次，每次3分鐘；步驟八、加DAB顯色劑室溫孵育切片5分鐘后，用蒸餾水沖洗切片2次，每次3分鐘，在顯微鏡下觀察，掌握染色時間，陽性信號為黃色或者棕黃色，觀察完畢后，用蒸餾水沖洗切片3次，每次3分鐘；步驟九、除去切片上的蒸餾水，加蘇木精淺染30-60秒后，用蒸餾水沖洗2次，每次3分鐘；步驟十、除去切片上的蒸餾水，在切片未干時，直接滴加水性封片劑封片，60℃烘干15-30分鐘，水性封片劑干燥后，待自然冷卻，再用中性樹膠封片即可。

3.根據權利要求2所述的用于鑒別乳腺肌上皮病變的檢測方法，其特征在于在步驟一中所述石蠟的熔點小于60℃。

4.根據權利要求2所述的用于鑒別乳腺肌上皮病變的檢測方法，其特征在于在步驟三中所述EDTA修復液為在100℃溫度下煮沸20?分鐘，其pH為8.0。

5.根據權利要求2所述的用于鑒別乳腺肌上皮病變的檢測方法，其特征在于在步驟七中所述AP-red顯色劑為現用現配。