[發(fā)明專利]一種利用SSR分子標(biāo)記鑒定苧麻品種的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310120547.0
• 申請(qǐng)日: 2013-04-09
• 公開（公告）號(hào): CN103194539A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳建華;欒明寶;王曉飛;許英;孫志民;鄒自征
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 長(zhǎng)沙市融智專利事務(wù)所 43114
• 代理人: 袁靖

1.一種利用SSR分子標(biāo)記鑒定苧麻品種的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）提取各樣品苧麻種質(zhì)DNA；

（2）利用設(shè)計(jì)的8對(duì)苧麻EST-SSR引物，擴(kuò)增苧麻的基因組DNA；

（3）記錄每個(gè)樣品每對(duì)引物的DNA擴(kuò)增帶型；

（4）根據(jù)DNA擴(kuò)增帶型區(qū)分鑒定苧麻品種；

所述的8對(duì)苧麻EST-SSR引物序列如下：

ibfc50：F:AACAATCCAGGAGTGGCAATC

R:ACAAGCGAAGATCGTCTCATC；

ibfc40F:TGTATAGAACTGAGTAAATGATTG

R:CAACTTTCTTAAACCACTTTCG；

Ibfc27F:AGCCAGGTTCCAGAAGTCC

R:CATAATCACAAAGTCTCGGTTCC；

Ibfc11F:GCGGAGGCTTAATTTGCTTTG

R:ACTCAATACATACACGGCACTAG；

ibfc65F:ACGAACCACAACACAGAGAG

R:ACGAGGGAACACCAGAGAG；

ibfc62F:GAAACTATTTCCACCAACAAAG

R:ACACACATTCCTACACACC；

ibfc53F:GGCTCAAGTTTGCTCATAGATTC

R:CGGCTTCGCTTTAGGATTTG；

ibfc20F:AGTGCGGAGATAACTGTTC

R:GGCTACTTTATTCTAAACCAAAC。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用SSR分子標(biāo)記鑒定苧麻品種的方法，其特征在于，PCR反應(yīng)體系:20μL，

體系組成終濃度Mg²⁺2.0mmol/LTaq?Buffer1×dNTP?Mix200μmol/LTaq?Enzyme1UPrimers0.25μmol/LDNA90ng

體系中余量為水。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用SSR分子標(biāo)記鑒定苧麻品種的方法，其特征在于，

PCR擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性5min，94℃變性1min，根據(jù)引物的退火溫度復(fù)性50sec，72℃延伸1min，29次循環(huán)后72℃延伸10min；

引物Ibfc50、ibfc40、ibfc27、ibfc11、ibfc65、ibfc62、ibfc53、ibfc20的退火溫度分別為：50°C、52°C、56°C、51°C、60°C、54°C、56°C、54°C。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用SSR分子標(biāo)記鑒定苧麻品種的方法，其特征在于，步驟（4）具體是對(duì)每個(gè)樣品不同的DNA擴(kuò)增帶型賦值，構(gòu)建苧麻SSR分子標(biāo)記身份證，以區(qū)分苧麻品種。