[發明專利]HPV16L2重組腺病毒疫苗的制備方法無效

申請號：	201310111951.1	申請日：	2013-04-02
公開（公告）號：	CN103191444A	公開（公告）日：	2013-07-10
發明（設計）人：	周玉柏;曾毅;郭艷濤;李澤琳;李勁濤	申請（專利權）人：	北京工業大學
主分類號：	A61K48/00	分類號：	A61K48/00;A61K39/12;A61P31/20;A61P35/00;C12N15/861;C12N7/01;C12N15/37
代理公司：	北京思海天達知識產權代理有限公司 11203	代理人：	劉萍
地址：	100124 ***	國省代碼：	北京;11
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	hpv16l2 重組病毒疫苗制備方法
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

技術領域

本發明涉及含SEQ?ID?No：1所示的核苷酸序列的復制缺陷型重組腺病毒的制備方法。

背景技術

人乳頭狀瘤病毒（Human?papillomavirus，HPV）屬乳多空病毒科，是無包膜的閉環雙鏈DNA病毒。現已明確，高危型HPV如HPV16、18的持續感染與宮頸癌的發生密切相關，被確定為導致宮頸癌的主要病因，其中又以HPV16型最為常見（Bosch?F?X,J?Natl?Cancer?Inst,1995,87:796–802.）。基于HPV的宮頸癌預防和治療性疫苗已經開展了很長時間，其中又以HPV的主要衣殼蛋白L1為重點研究對象，目前臨床上已經有了比較成功的疫苗誕生，分別是默克公司的四價疫苗和葛蘭素史克公司的兩價疫苗。

不同型別的HPV?L1VLP在空間構想上存在差異，導致了其不可以產生很好的交叉保護，但只是簡單的增加L1VLP的價位而謀求增加交叉保護的效果又會增加疫苗的安全風險和副作用，嚴重制約著基于L1的疫苗的研究。大量的實驗證實，HPV16的次要衣殼蛋白L2的N端具有中和多種HPV基因型的交叉中和表位，是很有前景的候選宮頸癌疫苗（Kawana?K，Virology,1998,245:353-359）。針對于L2的蛋白疫苗目前已經有報道，并且已經取得了一些階段性的成果，但是蛋白疫苗純化工藝繁瑣，成本高昂，不利于在發展中國家進行推廣，同時其免疫原性較差也嚴重制約了進一步研究。

本發明試圖構建一種成本低廉，同時可有效激發機體產生特異性免疫反應的疫苗。研究表明，復制缺陷型重組腺病毒嗜性廣泛，能夠感染包括粘膜上皮細胞在內的多種細胞，介導外源基因在細胞內的穩定表達并刺激機體產生特異性體液及細胞免疫反應，重組腺病毒還可將抗原呈遞給免疫系統，有效激發局部和遠端粘膜表面的特異性免疫反應，被認為是最為理想的免疫載體之一（Xiang?Z?Q,J?Immunol,1999,162:6716-6723）。與此同時，復制缺陷型重組腺病毒基因不與受體細胞基因組發生整合，具有良好的生物安全性（McConnell?M?J,Human?Gene?Therapy,2004,15(11):1022-1033.）。此外，重組腺病毒還具有便于大規模培養制備、成本低廉等優點，因此是理想的HPV候選預防性疫苗之一。所以我們確定以重組腺病毒作為HPV16L2基因的病毒載體。

發明內容

為了使SEQ?ID?No：1序列能夠獲得高效表達和呈遞，本發明提供一種HPV16L2復制缺陷型重組腺病毒疫苗。

本發明的技術方案如下：

本發明提供一種HPV16L2復制缺陷型重組腺病毒疫苗，含有SEQ?ID?No：1所示核酸序列。

本發明還提供制備上述HPV16L2復制缺陷型重組腺病毒疫苗的方法，包括如下步驟：

（1）將SEQ?ID?No：1所示的核苷酸序列克隆到腺病毒穿梭質粒中，得到重組腺病毒穿梭質粒。

（2）用步驟（1）制備的重組腺病毒穿梭質粒和pBHGloxΔE1,3Cre質粒共轉染腺病毒包裝細胞，得到含有SEQ?ID?No：1所示的核苷酸序列的重組腺病毒。

所述腺病毒穿梭質粒是質粒pDC316，所述腺病毒包裝細胞是293細胞。

本發明更進一步提供一種HPV16L2復制缺陷型重組腺病毒疫苗，其有效成分為上述HPV16L2復制缺陷型重組腺病毒。

本發明提供的HPV16L2復制缺陷型重組腺病毒疫苗可用于制備預防和治療子宮頸癌和食管癌的藥物。所述復制缺陷型重組HPV16L2腺病毒應用于制備預防和治療有一種或多種HPV病毒引起的子宮頸癌以及食管癌的藥物制劑，所述一種或多種HPV病毒選自16、18、31和45型。

本發明實現的技術效果如下：

本發明提供的HPV16L2復制缺陷型重組腺病毒，用于制備HPV16L2復制缺陷型重組腺病毒疫苗，產生良好的細胞免疫和體液免疫，得到良好的預防效果。