[發(fā)明專利]一種植物體內鐵元素染色方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310108059.8
• 申請日: 2013-03-29
• 公開（公告）號: CN103207104A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設計）人: 葉宏;劉培衛(wèi);秦璐;王美歡;梁雪嬌
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

技術領域：

本發(fā)明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種植物體內鐵元素染色方法。

背景技術：

普魯士藍（Perls)染色法是一種古老而又敏感的顯示鐵的染色方法。反應原理是組織內的高價鐵與亞鐵氰化鉀反應生成不可溶的藍色沉淀（普魯士藍）。因為它操作簡單，成本低，特異性好，現(xiàn)為實驗室最常用的顯示生物體內鐵分布的方法(Meguro,Asano?et?al.2007)。目前，在植物鐵代謝的研究中，顯示鐵分布的方法是在切片的基礎上再加上Perls染色(Green?and?Rogers2004,Roschzttardtz,Conejero?et?al.2009,Zhang,Xu?et?al.2012)。這種方法不但不能從整體上顯示植物體內的鐵的分布，而且試驗周期長（大約一周），費時，費力。

水合氯醛試液，為常用優(yōu)良的化學透明劑，它能迅速滲透入組織，還可以使干燥收縮的細胞迅速復原，并能溶解大多數(shù)細胞內含物，使細胞清晰透明。水合氯醛透明劑能否用在Perls鐵染色中，來替代費時費力的切片，還沒有研究報道。

發(fā)明內容：

本發(fā)明的目的是彌補傳統(tǒng)的切片+Perls鐵染色方法的不足，提供一種簡單、快速、成本低的從整體上顯示植物體內鐵分布的植物體內鐵元素染色方法。

本發(fā)明的植物體內鐵元素染色方法，其特征在于，包括以下步驟：

將植物材料分割成小塊，將其浸入Perls染色液中染色，染色后的植物材料小塊用去離子水漂洗，漂洗后植物材料小塊置于水合氯醛試液中，直至植物材料小塊完全透明為止，取出植物材料小塊即得到鐵元素染色好的材料。

鐵元素染色好的材料就可以置于載玻片上，也可以直接用水合氯醛試液+鐵元素染色好的材料制成臨時裝片，在顯微鏡下觀察，含鐵的組織被染成藍色（普魯士藍）。

所述的水合氯醛試液屬于本領域技術人員常用的化學透明劑，其配制方法為：取水合氯醛50g，加水15ml和甘油10ml，溶解即為水合氯醛試液，備用。

所述的Perls染色液屬于本領域技術人員常用的染色液，其配方為：

（A）4%鹽酸：取2ml濃鹽酸溶于50ml去離子水中；

（B）4%亞鐵氰化鉀：2g亞鐵氰化鉀溶于50ml去離子水中。

每次染色前，將A液和B液等量混合，成熟15分鐘后，方可用于染色。

所述的小塊，優(yōu)選為2×2×2mm³的小塊，染色時長為30min，去離子水漂洗的次數(shù)為3次。

漂洗后植物材料小塊置于水合氯醛試液中，直至植物材料小塊完全透明為止，在此過程中，可以更換一次水合氯醛試液。

上述植物體內鐵元素染色方法的步驟中，1．所用的試劑最好用分析純，所使用的水是超純水或去離子水，所使用容器必須要純凈，操作全程最好配戴手套并避免與反應液體接觸，不要接觸金屬，這樣可以保證結果的可靠性；2．最好選用已知的陽性染色作為對照染色；3．Perls染色液一定要現(xiàn)用現(xiàn)配，超過l小時或溶液呈現(xiàn)微談綠色，說明該溶液失效了；4．Perls染色液中染色時注意觀察，可根據(jù)染色的深淺延長或縮短時間，這屬于本領域的常規(guī)知識。

本發(fā)明將普魯士藍Perls鐵染色法和水合氯醛透明法有機的結合起來，在盡量保持植物材料完整的情況下，在整體上顯示其植物體內鐵的分布，其具有周期短：切片法一般需要一周的時間才能得到結果，而本方法可以在一天內得到結果；操作簡單，不需要昂貴設備的優(yōu)點。附圖說明：

圖1是實施例1的擬南芥種子經(jīng)本發(fā)明方法染色后的染色圖；

圖2是實施例1的擬南芥種子經(jīng)本發(fā)明方法染色后的胚的染色圖；

圖3是實施例2的水稻胚經(jīng)本發(fā)明方法染色后的染色圖；

圖4是實施例3的擬南芥的成熟種子經(jīng)Perls-DAB染色法染色后橫切面的染色圖；

圖5是實施例3的擬南芥的成熟種子經(jīng)Perls-DAB染色法染色后縱切面的染色圖；

圖6是實施例4的擬南芥花蕾經(jīng)本發(fā)明方法染色后的染色圖。

具體實施方式：

以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。

水合氯醛試液，其配制方法為：取水合氯醛50g，加水15ml和甘油10ml，溶解即為水合氯醛試液，備用。

Perls染色液，其配方為：

（A）4%鹽酸：取2ml濃鹽酸溶于50ml去離子水中；

（B）4%亞鐵氰化鉀：2g亞鐵氰化鉀溶于50ml去離子水中。

每次染色前，將A液和B液等量混合，成熟15分鐘后，方可用于染色。