[發明專利]在線親水相互作用色譜/反相色譜串聯接口裝置及其應用

有效

• 申請號: 201310106743.2
• 申請日: 2013-03-29
• 公開（公告）號: CN104076113A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 張麗華;翁葉靖;曲焱焱;張曉丹;楊開廣;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/46
• 分類號: G01N30/46
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

技術領域

本發明涉及液相色譜技術領域，具體的說，是一種在線親水相互作用色譜/反相色譜串聯接口裝置，實現了在線的親水相互作用色譜/反相色譜直接相互串聯。

背景技術

親水相互作用色譜（HILIC）作為一種分離極性化合物的液相色譜模式，最早由Alpert于1990年提出（Alpert?J.,J.Chromatogr.A,1990,400:177）。其主要特征是：使用類似于正相色譜的極性固定相和水/有機溶劑（通常是乙腈）流動相（其中水是強洗脫溶劑）。已有不少研究表明，當使用水-水溶性有機溶劑做流動相時，親水性的固定相表面會含有一層富水層，樣品在HILIC上的保留包含分配機理（Ulrich?T.Angew.Chem.Int.Edit.,2012,51,6251-6254）。此外，HILIC還具有與反相色譜（RP）相媲美的柱效和對稱的峰形，又能與多種檢測器有良好的兼容性。隨著蛋白質組學的發展，一方面，HILIC模式對強極性化合物和親水化合物具有很好的保留和分離選擇性，因此越來越多的蛋白質和多肽樣品等強極性化合物需要利用HILIC進行選擇性分離；另一方面，HILIC的分離機理與RP完全不同，兩者的分離選擇性具有很好的正交性，而且兩者的流動相體系十分類似，十分適合構建HILIC/RP色譜系統，相對于其他聯用模式具有更高的正交性，在蛋白組學具有非常大的發展潛力。

然而，在實際應用中，RP中作為強洗脫劑的有機相在HILIC中是流動相的弱洗脫劑，而在RP中作為弱洗脫劑的水卻是HILIC中的強洗脫劑，其含量高低會顯著影響組分在柱上的保留。這種流動相的不兼容性導致這兩種分離模式無法直接實現在線聯用，因此HILIC與RP的直接在線串聯一直以來都是一個難題。針對此問題，本發明設計了一種惰性氣體置換第一維色譜柱中殘留溶劑的裝置，除去了第一維色譜柱中殘留的溶劑，實現了HILIC與RP的直接在線串聯。該裝置具有簡單、實用、省時、高效的特點。實現樣品在第二維色譜柱上的保留。

發明內容

本發明目的為了克服HILIC/RP串聯中流動相的不兼容問題，提供了一種新型的在線HILIC/RP串聯接口，具有價格低廉，操作簡單，省時，實用，樣品損失小，高效，通用性強等優點。

本發明的目的通過以下技術方案來實現：

一種在線親水相互作用色譜/反相色譜串聯接口裝置，

可以是親水相互作用色譜-反相色譜串聯，也可以是反相色譜-親水相互作用色譜串聯；

在線親水相互作用色譜/反相色譜串聯接口裝置：第一維色譜柱一端經第一切換閥通過管道分別與高壓惰性氣體源出口減壓閥和高壓恒流泵相連，另一端經第二切換閥通過管道分別與第二維色譜柱和第二廢液相連；

通過進樣，切換第一、第二切換閥和開關高壓惰性氣體源，高壓惰性氣體置換第一維色譜柱中殘留的溶劑，實現樣品在第二維色譜柱上的保留;

第一維色譜柱為親水相互作用色譜，第二維色譜柱為反相色譜；或第一維色譜柱為反相色譜，第二維色譜柱為親水相互作用色譜。

高壓惰性氣體源為不影響親水相互作用色譜和反相色譜保留機理的所有惰性氣體（如：氮氣）。

所述的親水相互作用色譜色譜柱可以是以氨基、多醇基、酰胺、兩性離子等作為固定相的親水相互作用色譜柱之一，反相色譜可以是以C18，C12，C8，C4等作為固定相的反相色譜柱之一。

所述的高壓恒流泵是高效液相色譜所配備的高壓恒流泵或其他提供動力的泵系統。

所述的切換閥可以是十通閥、八通閥、六通閥等切換閥中的一種。

所述的減壓閥一端與高壓惰性氣體源相連，另一端通過切換閥與第一維色譜柱相連，減壓閥調壓范圍可以從0MPa到20MPa不等。

所述的第一維色譜柱中殘留的溶劑是會影響第二維色譜柱保留的溶劑。

所述的進樣可以是定量環上的手動進樣或自動進樣器的自動進樣。

所述的在線親水相互作用色譜/反相色譜串聯接口裝置在小分子化合物及生物大分子（蛋白質、肽段、糖類、或脂類）分離中的應用。

所述第一切換閥通過管道與第一廢液相連。

高壓恒流泵與高壓惰性氣體源和切換閥1一端相連，切換閥1另一端與廢液瓶1和第一維色譜柱相連，第一維色譜柱與切換閥2（6）一端相連，切換閥2的另一端與廢液瓶2和第二維色譜柱相連。