[發(fā)明專利]一種水稻溫敏雄性核不育基因RNaseZ分型的方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310096502.4 | 申請日： | 2013-03-25 |
| 公開（公告）號： | CN103160583A | 公開（公告）日： | 2013-06-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 舒慶堯;張華麗;黃建中 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江大學;無錫求是生物農(nóng)業(yè)有限公司;浙江之豇種業(yè)有限責任公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡紅娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 水稻 雄性 不育 基因 rnasez 方法 | ||
1.一種水稻溫敏雄性核不育基因RNaseZ分型的方法，包括：
（1）提取水稻樣品DNA；
（2）根據(jù)RNaseZ基因的第70～71位核苷酸的多態(tài)性，設(shè)計引物，進行PCR擴增；
（3）對PCR擴增產(chǎn)物進行特性分析，確定水稻樣品的基因型。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述特性分析為高分辨率溶解曲線分析或擴增產(chǎn)物酶切片段多態(tài)性分析。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，若進行高分辨率溶解曲線分析，步驟（2）中，所述引物的堿基序列為：
上游引物RNZ-F3：5’-ATGGCGAACAGCGGCAAGTCA-3’；
下游引物RNZ-R1：5’-TGAAGAGGAACTCCTGCGAGACGG-3’。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述PCR擴增的體系為：2×PCR?Master?Mix，5μL；10μM的上游引物RNZ-F3，0.2μL；10μM的下游引物RNZ-R1，0.2μL；10×LC?green-Plus，1μL；25ng/μL的DNA，1μL；無菌水2.6μL；礦物油10-20μL。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述PCR擴增的程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，50-60℃退火30s，72℃延伸30s，共35-40個循環(huán)；72℃延伸7min。
6.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，若進行擴增產(chǎn)物酶切片段多態(tài)性分析，步驟（2）中，所述引物為兩對，其中，
第一對引物的堿基序列為：
上游引物RNZ-F1：5’-ACCGCGCCGCCACCGGGTCGGCCGGAG-3’；
下游引物RNZ-R1：5’-TGAAGAGGAACTCCTGCGAGACGG-3’；
第二對引物的堿基序列為：
上游引物RNZ-F2：5’-ACCGCGCCGCCACCGGGTCGGCCCAAG-3’；
下游引物RNZ-R1：5’-TGAAGAGGAACTCCTGCGAGACGG-3’。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述PCR擴增的體系為：2×PCR?Master?Mix，10μL；10μM的上游引物，0.4μL；10μM的下游引物，0.4μL；25ng/μL的DNA，1μL；補充無菌水至20μL。
8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述PCR擴增的程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，50-60℃退火30s，72℃延伸30s，共35-40個循環(huán)；72℃延伸7min。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，第一對引物的擴增產(chǎn)物采用Hinf?I進行酶切，第二對引物的擴增產(chǎn)物采用Sty?I進行酶切。
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