[發(fā)明專利]多個(gè)抗口蹄疫shRNA串聯(lián)表達(dá)載體、其構(gòu)建方法及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310089101.6
• 申請(qǐng)日: 2013-03-20
• 公開（公告）號(hào): CN103184235A
• 公開（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石德順;張曉溪;崔奎青;劉慶友;李湘萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/63
• 分類號(hào): C12N15/63;C12N15/867;C12N15/66;C12Q1/70;C12Q1/68;A61K49/00;A01K67/027
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程、病毒學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種多個(gè)抗口蹄疫shRNA串聯(lián)表達(dá)載體、其構(gòu)建方法及其應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

口蹄疫(foot-and-mouth?disease，F(xiàn)MD)，是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth?disease?virus，F(xiàn)MDV)引起的以侵害偶蹄動(dòng)物為主的急性、熱性、高度接觸性人畜共患傳染病，在國際上受到高度重視。該病毒屬于小RNA病毒科FMDV屬，有O型，A型，C型，SAT?I型，SAT?II型，SATIII型及Asia?I型等7個(gè)血清型，70多個(gè)亞型，各型之間無交叉反應(yīng)。流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)感染證明，有100多種動(dòng)物可以感染。口蹄疫已被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(world?organization?of?animal?health，OIE)列為A類動(dòng)物傳染病之首。

(一)口蹄疫的發(fā)生和危害：

口蹄疫的發(fā)生早在五六百年前就已經(jīng)有記載，在14-15世紀(jì)就有類似口蹄疫的牛病的描述。最早對(duì)于口蹄疫發(fā)生和流行的描述，應(yīng)追溯到1546年，意大利學(xué)者Girolamo?Fracastor較為詳細(xì)地記錄了1514年在意大利Friuli、Venice、Verona等地先后暴發(fā)口蹄疫的情況。

自意大利發(fā)生口蹄疫以來，口蹄疫在歐洲大陸流行了幾百年，17-18世紀(jì)，口蹄疫在法國、意大利、德國、瑞士、奧地利等國經(jīng)常大規(guī)模流行。英國也在1839年發(fā)生了口蹄疫。此后歐洲在1845-1894年之間均有口蹄疫的廣泛流行。1991年保加利亞發(fā)生了一次規(guī)模較大的疫情。2001年口蹄疫在英國流行，同年9月歐洲各國聲稱口蹄疫在歐洲已經(jīng)被消滅，然而在2007年8月英國由于實(shí)驗(yàn)室管道泄漏，再次出現(xiàn)口蹄疫。

根據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(food?and?agriculture?organization?of?the?United?Nation，F(xiàn)AO)和OIE發(fā)表的家畜衛(wèi)生年鑒統(tǒng)計(jì)資料，1951-1953年亞洲每年都曾發(fā)生口蹄疫的大流行，1959年亞洲有16個(gè)國家或地區(qū)發(fā)生口蹄疫，1977年有13個(gè)，1979年多達(dá)30個(gè)，1982-1983年有27個(gè)，1984年有16個(gè)，1985年有10個(gè)，1987年又上升為22個(gè)，1989年仍有17個(gè)國家或地區(qū)流行口蹄疫。到了90年代后，亞洲口蹄疫疫情更為嚴(yán)峻。最嚴(yán)重的是1997年和2000年中國臺(tái)灣和日本、韓國暴發(fā)大規(guī)模口蹄疫，損失嚴(yán)重。

中北美國家是世界上最早消滅口蹄疫的國家和地區(qū)，美國于1929年、加拿大于1952年、墨西哥于1954年宣布消滅口蹄疫。此前美國歷史上口蹄疫曾發(fā)生了9次，墨西哥在1926年和1946年曾2次暴發(fā)口蹄疫，經(jīng)過采取許多周密而有效的措施撲滅了疫情。南美國家口蹄疫的疫情較為嚴(yán)重，多年來造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。不過經(jīng)過南美各國在防制方面的努力，1981年智利宣布為無口蹄疫國家；到90年代，OIE曾將烏拉圭、阿根廷、巴拉圭、巴西劃為“疫苗免疫的無口蹄疫國家或地區(qū)”。幾年之后，口蹄疫又入侵阿根廷南部地區(qū)，只有智利一直保持著無口蹄疫國家的地位。

口蹄疫的發(fā)生和流行對(duì)當(dāng)?shù)氐陌l(fā)展有著巨大的危害，以我國臺(tái)灣地區(qū)1997年3月的疫情為例。這場(chǎng)口蹄疫風(fēng)暴前后歷時(shí)3個(gè)多月，共波及6147個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)，1011674頭豬發(fā)病，184231頭豬死亡，撲殺了600萬頭豬，直接經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)15.52億美元，相關(guān)行業(yè)的間接經(jīng)濟(jì)損失為62.08億美元，國民經(jīng)濟(jì)總產(chǎn)值損失達(dá)104.76億美元。

(二)RNAi技術(shù)在抗病毒上的應(yīng)用：

由于病毒的入侵，很有可能造成宿主細(xì)胞的復(fù)制、代謝及其它正常生理功能受到影響，甚至使宿主細(xì)胞死亡，最終導(dǎo)致宿主的發(fā)病乃至死亡。目前抵抗和消除病毒感染給宿主帶來的不良后果，主要依賴于抗病毒的藥物和干擾素，然而病毒為了生存會(huì)在進(jìn)化中不斷形成新的耐藥性，而且某些藥物和干擾素對(duì)動(dòng)物機(jī)體會(huì)產(chǎn)生很大的副作用。RNAi能阻斷病毒感染途徑，或抑制其作用過程中關(guān)鍵蛋白質(zhì)的表達(dá)，是對(duì)抗病毒感染最有效的方式。因此，RNAi的出現(xiàn)給抗病毒研究提供了新思路，為病毒病治療帶來了新希望。

然而，科學(xué)家們至今已針對(duì)FMDV不同基因在細(xì)胞和動(dòng)物等不同水平對(duì)RNAi抗FMDV效果進(jìn)行了研究和探索。據(jù)報(bào)道，在長(zhǎng)期使用siRNA抑制病毒復(fù)制的治療過程中會(huì)使病毒基因變異而產(chǎn)生RNAi抗性，導(dǎo)致病毒逃逸。而為了解決這一問題，人們開始針對(duì)病毒基因組保守區(qū)或同時(shí)以不同基因序列作為靶基因。

發(fā)明內(nèi)容