[發明專利]一種合成四甘氨肽的方法

無效

• 申請號: 201310083354.2
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN103204905A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 李德勇;伍萬兵;陳紋銳;蒲國波;曾凱
• 申請（專利權）人: 四川同晟生物科技有限公司
• 主分類號: C07K5/103
• 分類號: C07K5/103;C07K1/06
• 代理公司: 成都蓉信三星專利事務所 51106
• 代理人: 劉克勤

技術領域

本發明涉及一種四甘氨肽的合成方法，屬于化學合成技術領域。

背景技術

雙甘氨肽用作生化試劑，在生物研究及醫藥上用作血液保存和蛋白質藥物細胞色素C水針劑的穩定劑。三甘氨肽是合成腎功能顯像藥物的主要原料。四甘氨肽為四個甘氨酸分子通過肽鍵有序鏈接而成，它和三甘氨肽、雙甘氨肽都在多肽及藥物合成方面得到重要應用，四甘肽是合成抗凝血酶藥物比伐盧定的一個重要短肽，見專利CN201110170669.1，CN200910028793.7，CN?200980152943.3。

目前，雙甘氨肽的合成采用甘氨酸在甘油中高溫脫水,經堿水解,酸中和,酒精結晶得產品,此方法中，作為綜合用的甘油中加了水不可套用,后序處理產生氯化鈉,對于作為成品使用對雜質要求較嚴,很難合格。三甘氨肽采用氯乙酰氯與雙甘氨肽在堿性條件下反應再氨解獲得,但此工藝控制單雜很難達到0.2%。四甘氨肽主要采用Z-GLY-GLY-OSU與GLY-GLY的酯在有機溶劑中縮合反應，再氫解得產品，此反應中因Z-GLY-GLY-OSU的溶解性不好,收率較低,且雙甘氨肽要酯化又需在有機溶劑中反應，成本相應較高。

發明內容

本發明的目的，是克服上述技術的缺點，提供一種合成四甘氨肽的方法，該方法采用多種保護組合的循序合成方式,在合成雙甘氨肽時，乙二醇可套用，后序處理不產生氯化鈉，產品合格率高；在合成三甘氨肽時，可確保產品單雜0.2%以下，純度99.0%以上(HPLC)；在合成四甘氨肽時，反應物溶解性好,收率高，且酯化無需在有機溶劑中進行，成本低。技術方案是：

一種四甘氨酞的合成方法，采用循序合成法，其步驟為：

1、甘氨酸縮合開環后生產雙甘氨肽；

2、雙甘氨肽與經N-保護的甘氨酸活化酯縮合，脫保護后生產三甘氨肽；

3、三甘氨肽與N-保護的甘氨酸活化酯縮合，脫保護后生產四甘氨肽。

所述合成雙甘氨肽的具體步驟是，取乙二醇、甘氨酸，混合攪拌，升溫至170-175℃反應，反應完全后，加水冷卻至室溫，離心得粗品，再加入鹽酸水解,冷卻離心得固體，加入氫氧化鋰溶液調節PH5.5-6，加入活性碳脫色，加入酒精過濾得雙甘氨肽粗品，再用水重結晶,加入酒精,過濾洗滌至氯合格,干燥得雙甘氨肽。?或

取乙二醇母液、甘氨酸，混合攪拌，升溫至170-175℃反應，反應完全后，冷卻至室溫，離心得粗品，粗品加入2N氫氧化鋰水溶液于30-40℃保溫30-60分鐘,用鹽酸中和PH5.5-6.0，加入活性碳精制脫色，加入酒精過濾得雙甘氨肽粗品，再用水重結晶，加入酒精，過濾洗滌，干燥得雙甘氨肽。

所述合成三甘氨肽的具體步驟是，將水、?甘氨酸混合，用4N氫氧化鈉水溶液維持PH=9-10，保持溫度5-10℃，滴加入氯甲酯芐酯，滴加完后自然升溫反應，至氯甲酸芐酯反應完全，加入乙酸乙酯，用鹽酸中和PH2.2-2.5，攪拌結晶，離心洗滌，烘干得Z-甘氨酸；再加入乙酸乙酯、HOSU、?DCC，于25-30℃反應，至芐氧羰基甘氨酸本反應完全,過濾掉固體得Z-GLY-OSU/乙酸乙酯液，滴入雙甘氨肽、水、碳酸氫鈉混合液中，于室溫反應，至Z-GLY-OSU反應98％以上，在反應終點分出乙酸乙酯層，再用乙酸乙酯提取上層雜層，用鹽酸中和PH=2.2-2.5，攪拌離心得Z-gly-gly-gly-OH,用乙酸乙酯/正已烷重結晶，烘干得Z-三甘氨肽純品；再將Z-三甘氨肽、乙酸乙酯、Pa/C?混合，攪拌下通入氫氣，保持壓力0.1-0.Mpa，于30-40℃氫解，待氫解完全，過濾得三甘氨肽與Pa/C?混合物，此混合物加入水，升溫溶解，過濾回收Pa/C，濾液濃縮，加入酒精，過濾得三甘氨肽。?或