[發明專利]趨化因子受體CXCR3基因中與豬抗藍耳病相關的SNP標記及其應用

有效

• 申請號: 201310082332.4
• 申請日: 2013-03-14
• 公開（公告）號: CN104046623A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 李寧;陳志勝;任立明;胡曉湘
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種與豬抗藍耳病相關的SNP標記，其特征在于，其位于豬的趨化因子受體CXCR3基因上，所述SNP標記的核苷酸序列如SEQID?NO.1所示，其中，該序列的171bp和279bp兩處堿基為T的待測豬為易感藍耳病豬品種，而兩處堿基分別為G和C的待測豬為抗藍耳病豬品種。

2.用于檢測權利要求1所述與豬抗藍耳病相關的SNP標記的引物對，其特征在于，包括上游引物F：5’-CGCTCCCAGACTTCATCTTC-3’和下游引物R：5'-GAGGCAGTCACCTCTGAAGC-3'。

3.權利要求1所述與豬抗藍耳病相關的SNP標記在鑒定抗藍耳病豬品種中的應用，其包括步驟：

1）提取待測豬樣品組織中的總RNA，反轉錄成cDNA；

2）以步驟1）中的cDNA為模板，F和R為引物，進行RT-PCR反應；

3）分析PCR產物，如果擴增產物序列中171bp和279bp兩處的堿基分別為G和C，則待測豬為抗藍耳病豬品種。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟2）中反轉錄PCR包括的步驟為：

i）打開RNA二級結構

在一支無核酸酶污染的離心管中加入：

RNA??????????????????2μg

oligodT??????????????1μg

無核酸酶水補齊至?????15μl；

加熱離心管至70℃，5分鐘；

ii）反轉錄PCR

向上述離心管中加入：

反轉錄PCR的反應條件為：42℃，60min。

5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟2）中常規PCR使用的擴增體系以15μl計為：

6.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟2）中常規PCR的反應條件為：：95℃5min；以95℃30s，50℃-70℃，30s-2min；72℃30s-2min做35個循環；72℃10min，于4℃保溫。

7.含有權利要求2所述引物對的用于檢測抗藍耳病豬品種的試劑盒。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液中的一種或多種。

9.根據權利要求7或8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性模板。

10.權利要求1所述與豬抗藍耳病相關的SNP標記在豬的分子標記輔助育種中的應用。