[發明專利]鏈霉菌產生納他霉素與幾丁質酶的協同發酵方法

無效

• 申請號: 201310081250.8
• 申請日: 2013-03-14
• 公開（公告）號: CN103215327A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發明（設計）人: 陳捷;林振亞;吳瓊;馬佳;余傳金;高金欣;范莉莉;李雅乾
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62;C12N9/42;C12R1/465
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

技術領域

本發明涉及一種鏈霉菌產生納他霉素與幾丁質酶的協同發酵方法。

背景技術

目前，工業生產上對于鏈霉菌的發酵多采用的是優化單一拮抗物質納他霉素的發酵方法。例如1960年，Cynamadi報道了用傳統的發酵法生產納他霉素的方法。此后人們對于發酵納他霉素的研究很少，生產納他霉素直到近些年來才被人們重新拾起。1993年，M.A.艾森申克報道了生產納他霉素的方法。2002年，何艷玲等人對納他霉素產量的工藝進行了研究，在10L自動發酵罐發酵條件下，最終使納他霉素的產量提高到2~3g/L。2010年，李衛寧等，研究了褐黃孢鏈霉菌菌株WZ-18產納他霉素的培養條件及發酵培養基成分，優化后，納他霉素產量達到3.51?g/L。

但是，上述方法都是單一優化鏈霉菌所產生的一種抗生素，通過抗生作用抑制病原菌而達到生物防治目的，但是沒有研究另一個重要拮抗因子幾丁質酶的產生及作用。幾丁質酶在生物防治中具有如下重要作用：(1)?水解病原菌細胞壁；(2)?提高植物的防御能力；(3)與其他防御反應酶的協同增效作用。因此很有必要研究納他霉素與幾丁質酶協同表達方法。

發明內容

本發明針對現有發酵技術只優化一種拮抗物質的不足，提供一種能夠有效誘導鏈霉菌協同產生納他霉素與幾丁質酶的協同發酵方法，實現了在一種培養基中同時誘導兩種拮抗物質協同高效表達，使得發酵液抑菌活性大大增加。本發明通過不同時間添加不同誘導物解決了納他霉素產生的阻遏問題。本發明方法以鏈霉菌為研究對象，誘導其產生兩種拮抗物質幾丁質酶與納他霉素，實現了誘導抗性、降解病原菌細胞壁與抗生作用三種生防機制，可以防治多種作物病害，為新型復合生物農藥的建立奠定了基礎。

本發明的技術方案如下：

一種鏈霉菌產生納他霉素與幾丁質酶的協同發酵方法，為：在一種培養基中不同時間分別添加納他霉素誘導物與幾丁質酶誘導物對鏈霉菌進行發酵培養，在誘導初始階段添加納他霉素誘導物，在所述納他霉素誘導物消耗殆盡時，添加幾丁質酶誘導物。

一種鏈霉菌產生納他霉素與幾丁質酶的協同發酵方法，包括以下步驟：

1）??????????????將鏈霉菌在如下發酵培養基中進行發酵：納他霉素誘導物40.38g/L，黃豆粉?28.11g/L,?大豆蛋白胨?14.91g/L，CaCO₃?5g/L，MgSO₄·7H₂O?0.5g/L，K₂HPO₄?0.5g/L；發酵條件為：初始pH?6.0，3%的接種量，裝液量50/250mL，溫度28℃，轉速180r/min；

2）??????????????在發酵第4天，納他霉素誘導物消耗殆盡時添加幾丁質酶誘導物11g/L；

3）??????????????發酵8天后得到發酵液。

優選地，所述納他霉素誘導物為葡萄糖。

優選地，所述幾丁質酶誘導物為幾丁質粉。

與現有技術相比，本發明的有益效果如下：

第一．本發明克服了傳統發酵過程中都是以提高單一抗生素產量為發酵目的，提出了一種誘導納他霉素與幾丁質酶協同發酵的方法，具體通過在發酵初期添加納他霉素誘導物，發酵一段時間后待納他霉素誘導物消耗殆盡時，添加幾丁質酶誘導物，解決了納他霉素誘導物對于幾丁質酶產生過程的阻遏作用，大大促進了菌株產生幾丁質酶的能力；

第二．本發明方法以鏈霉菌為研究對象，誘導其產生兩種拮抗物質幾丁質酶與納他霉素，實現了誘導抗性、降解病原菌細胞壁與抗生作用三種生防機制，可以防治多種作物病害，為新型復合生物農藥的建立奠定了基礎；

第三．本發明的協同發酵思想還可用于其它生防菌發酵，能實現同一生防菌在同一種培養基中高效表達不同的拮抗物質，通過不同的作用機制來達到協同防治病蟲害的目的。

當然，實施本發明的任一產品并不一定需要同時達到以上所述的所有優點。

具體實施方式

下方結合具體實施例對本發明做進一步的描述。

實施例

本實施例采用的鏈霉菌為拮抗木霉菌株，利迪鏈霉菌A01-chit33CT（Streptomyces?lydicus），來自上海交通大學農業與生物學院農業部都市農業（南方）重點實驗室。

本實施例的鏈霉菌采用如下方法發酵培養：