[發明專利]一株枯草芽孢桿菌及其生物防治制劑和應用

有效

• 申請號: 201310077644.6
• 申請日: 2013-03-12
• 公開（公告）號: CN103131657A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 牛贍光;朱衛東;王清海;張淑靜;段春華;劉幸紅
• 申請（專利權）人: 牛贍光;朱衛東
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/125
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 韓百翠

技術領域

本發明屬于生物防治植物病害領域。具體而言，本發明涉及一株能夠高效防治植物病害的枯草芽孢桿菌及其用途，以及采用該芽孢桿菌制備的生物防治制劑。

背景技術

植物病害嚴重影響農林作物生長和產品品質，甚至引起作物死亡，造成重大的經濟損失。對于植物病害的防治，常規采用的方法包括傳統的化學防治、培育抗病品種以及生物防治。抗病品種培育周期長，抗性單一，而化學防治，極易造成農藥殘留，環境污染；同時，化學農藥的長期使用，使得病原菌對其產生抗藥性，導致防效下降甚至失敗。利用有益微生物防治植物病害具有廣闊的前景。

芽孢桿菌是一種廣泛分布于各種不同生活環境中的腐生細菌，是一群好氧兼厭氧的產芽孢革蘭氏陽性桿菌的總稱，可以產生內生耐熱抗逆性芽孢。芽孢不僅對熱有抗逆性，還對紫外線、電磁輻射及一些化學藥品有很強的抗逆性，它可以忍受各種不良環境。由于具有如此強的抗逆性，使得它有利于生防菌劑的生產和劑型加工，也利于其在環境中的存活、定殖與繁殖。由于它們生長快、營養簡單、能夠形成具有較強抗逆性能力的芽孢，在產品開發中較非芽孢桿菌有效活菌數量高、性能穩定等優勢而備受矚目。芽孢桿菌是植物病害生防微生物的重要組成部分，可用于防治多種植物病害。芽孢桿菌作為生防菌防治植物病害的機制主要有：抗生作用、營養競爭、空間競爭、重寄生作用以及誘導植物產生抗性等機制，其主要的生防機制是以產生拮抗物質抑制有害病菌的生長或殺死病原菌。這些物質絕大多數為肽類抗生素，具有高效、低殘留、與環境友好等優點。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于高效防治多種植物病害的新的微生物——枯草芽孢桿菌菌株XLBS-01。本發明的枯草芽孢桿菌菌株具有生長速度快、產孢量大、作用譜廣、抗逆性強，在植物根際能夠快速大量定殖等特點，因此具有良好的應用前景。

本發明的上述目的是通過以下技術方案實現的：本發明所提供的菌株為枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）菌株XLBS-01，是從土壤中分離獲得的，已于2012年10月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所），保藏號為CGMCC?No.6692。其具有以下生物學特性：在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基或LB培養基上菌落形態為圓形或不規則形，乳白偏黃色，表面粗糙起褶皺，在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基上，28℃下培養兩天后，鏡檢，菌體細胞呈桿狀，能運動。經革蘭氏染色呈陽性(以大腸桿菌為對照)。經芽孢染色后觀察芽孢呈橢圓形或柱狀。

本發明枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）菌株XLBS-01的培養方法或繁殖方法包括：

（1）普通培養保存采用LB培養基，配方為胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂15-20g，蒸餾水1000mL，pH調至7.0-7.2；

（2）實驗室液體培養采用LB液體培養基，配方為胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，蒸餾水1000mL，pH調至7.0-7.2；

（3）固體培養基配方：固料和無機鹽溶液，所述固料和無機鹽的比例為質量比98.7：0.3；所述固料由質量比為稻殼：玉米粉：豆粕粉：麩皮=55：25：15：5的組成；所述無機鹽按質量百分比計，包含20%磷酸二氫鉀，5%硫酸鎂，10%硫酸銨，65%輕質碳酸鈣；

（4）大量發酵培養配方：同（3）中固體培養基配方

本發明還提供一種用于防治植物土傳病害和植物葉部病害的生物防治制劑，所述生物防治制劑包括所述的枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）菌株XLBS-01。

并且，本發明還提供了一種用于防治植物土傳病害的生物防治方法，所述生物防治方法包括向具有土傳病害的植物施用上述枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）菌株XLBS-01或者上述生物防治制劑。

本發明也提供了上述枯草芽孢桿菌菌或者上述生物防治制劑在防治植物土傳病害中的用途。

就上述生物防治制劑、生物防治方法以及用途而言，所述植物病害可以選自辣椒炭疽病、黃瓜靶斑病、葡萄霜霉病、月季白粉病中的一種或幾種。

本發明所述的生物防治制劑的制備方法包括以下步驟：

（1）制備所述枯草芽孢桿菌的種子液；

（2）將步驟（1）制備的種子液接種到固體培養基中，28～30℃下恒溫培養；