[發明專利]一種增強大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法有效
| 申請號： | 201310074890.6 | 申請日： | 2013-03-08 |
| 公開（公告）號： | CN103146773A | 公開（公告）日： | 2013-06-12 |
| 發明（設計）人： | 劉雙平;石貴陽;張梁;丁重陽;何冬旭;李贏 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12P13/22 | 分類號： | C12P13/22;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 無錫華源專利事務所(普通合伙) 32228 | 代理人： | 馮智文 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 增強 大腸桿菌 苯丙氨酸 外分泌 方法 | ||
1.一種增強大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于：將可同時過量表達酪氨酸轉氨酶TyrB、甲基紫羅堿外轉運蛋白YddG、3-脫氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合成酶AroG、分支酸變位酶和預苯酸脫水酶PheA、莽草酸激酶AroK以及莽草酸脫氫酶YdiB的重組質粒轉化宿主大腸桿菌，并通過液體發酵生產L-苯丙氨酸。?
2.根據權利要求1所述增強大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于：所述重組質粒是將大腸桿菌來源的TyrB、YddG、AroG、PheA、AroK以及YdiB編碼基因進行人工修飾以解除其所受代謝調控，并插入載體構建而成。?
3.根據權利要求1所述增強大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于所述液體發酵條件控制如下：發酵培養基的起始葡萄糖濃度為3～15g/L，發酵過程中的葡萄糖濃度為1～4g/L；發酵溫度35～42℃，發酵pH值6.5～7.5，通氣量0.5～1.0vvm，溶氧量為初始氧濃度的10～35%，發酵時間48～72h。?
4.根據權利要求2所述增強大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于：所述TyrB、YddG、AroG、PheA、AroK以及YdiB編碼基因的天然啟動子被其它不受末端代謝產物反饋阻遏的強啟動子所替換，以增強其表達水平。?
5.根據權利要求2所述增強大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于：所述TyrB編碼基因編碼框的起始堿基序列被SEQ?ID?NO:1所示的堿基序列替換，以解除其與阻遏蛋白TyrR的結合能力。?
6.根據權利要求2所述增強大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于：所述AroG氨基酸序列中第146位的天門冬氨酸被替換成天門冬酰胺，以解除苯丙氨酸對其的反饋抑制。?
7.根據權利要求2所述增強大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于：所述PheA的R-domain結構域被刪除，以解除苯丙氨酸對其的反饋抑制。?
8.根據權利要求4所述增強大腸桿菌L-苯丙氨酸胞外分泌的方法，其特征在于：所述強啟動子包括PR和/或PL啟動子。?
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