[發明專利]一種萬象組織培養的方法

無效

• 申請號: 201310073593.X
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103141387A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 呂永平;陳志;汪一婷;牟豪杰;周迪江;陳劍平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

1.一種萬象組織培養的方法，其特征在于：該方法包括以下幾個步驟：

1)外植體的選取及處理：選取萬象穗狀花序作為起始材料，收集到的萬象穗狀花序剝去小穗基部萼片，再將整個花序切成0.5cm長短，作為組培用外植體；

2）愈傷誘導：在超凈工作臺上，將經過表面消毒的外植體在轉移至無菌接種盤中，用無菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于初代培養基MS+6-BA3.0～5.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L中進行初代培養，培養溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

3）不定芽誘導：將獲得的增殖良好的萬象愈傷材料轉移至誘導培養基MS+6-BA1.0～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L中，進行不定芽，培養溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

4）不定芽增殖：在無菌工作臺上，將愈傷誘導獲得的1～1.5cm高的不定芽2～3個一叢，利用無菌的解剖刀將基部輕輕造成一些傷口，接種于不定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽增殖培養基為MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L，培養溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

5）壯苗培養：高生長到1.5～2cm的叢生不定芽2～3個一叢，接種到壯苗培養基MS+6-BA0.1～0.2mg/L+NAA0.01～0.1mg/L中培養，培養溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

6）不定芽生根誘導：從基部將高生長到3～5cm的叢生不定芽分開成單個不定芽，接入生根培養基中進行不定根的誘導，生根培養基為MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L，培養溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

7）組培苗馴化及移栽：不定芽基部長出3～5條1～2cm的不定根后，將組培移至溫室，散射光培養5d后打開瓶蓋，再培養1～2d，完成組培苗移栽前馴化，然后將組培苗從培養瓶取出，洗凈組培苗表面瓊脂，晾至表皮稍紅,，栽入基質中，保濕60％-80％以上培養15d，然后在溫室中正常培養。

2.根據權利要求1所述的萬象組織培養的方法，其特征在于：愈傷誘導、不定芽誘導及增殖、壯苗培養、不定芽生根誘導基本培養基均為MS培養基，蔗糖用量為20～40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8～9g/L，培養基pH分裝前調整為5.7～5.8。