[發(fā)明專利]抗體與微珠連接方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310072939.4
• 申請(qǐng)日: 2013-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN103159854A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭曉冬;殷赟;沙莎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K17/00
• 分類號(hào): C07K17/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務(wù)所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.抗體與微珠連接方法，其特征是包括以下步驟：?

1）、抗體與核苷酸交聯(lián)：

A、抗體的修飾與脫鹽：

25～100μg免疫球蛋白稀釋成濃度為2～8mg/mL后與SANH均勻混合后，于20～30?℃的搖床中孵育修飾2～6小時(shí)，SANH與免疫球蛋白的摩爾比為10～70：?1；

將所得的抗體修飾產(chǎn)物經(jīng)洗滌、離心過濾，以除去多余的SANH；得脫鹽后的抗體修飾產(chǎn)物；?

B、核苷酸的修飾與脫鹽：

用pH?7.0～7.6的磷酸緩沖液將核苷酸稀釋至6～12?mg/mL，加入SFB均勻混合，于20～30?℃的搖床中孵育修飾2～6小時(shí)，SFB與核苷酸的摩爾比為10～70：1；

將所得的核苷酸修飾產(chǎn)物經(jīng)洗滌、離心、過濾，以除去多余的SFB；得脫鹽后的核苷酸修飾產(chǎn)物；?

C、修飾后抗體與核苷酸的交聯(lián)與純化

將脫鹽后的抗體修飾產(chǎn)物和脫鹽后的核苷酸修飾產(chǎn)物按照1:8~12的摩爾比均勻混合，于2～8?℃充分反應(yīng)8～24小時(shí)，

將所得的交聯(lián)后產(chǎn)物經(jīng)洗滌、離心、過濾，除去游離寡核苷酸并進(jìn)行脫鹽；得純化后的抗體—核苷酸交聯(lián)體；?

2）、抗體—核苷酸交聯(lián)體與微珠作用：

微珠先經(jīng)洗滌液洗滌，然后靜置；

將1～9×10^-11?mol?biotin修飾的核苷酸加入5～15?μl?的Neutravidin包被的磁珠，于20～30?℃的搖床孵育10～30分鐘，接著用洗滌液洗滌；隨后加入上述5~10×10^-13?mol純化后的抗體—核苷酸交聯(lián)體，在6×SSPE緩沖液（pH?6.0）條件下于20～30?℃的搖床孵育1～4小時(shí)，再用洗滌液洗滌；得微珠體系；

所述洗滌液為將BSA用PBS溶液（pH?7.4）稀釋至質(zhì)量濃度為0.1~0.5?%而得?。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體與微珠連接方法，其特征是：

將所得的微珠體系進(jìn)行如下步驟：

在Cy3標(biāo)記的熒光二抗或轉(zhuǎn)基因蛋白中加入微珠體系，在20～30?℃條件下?lián)u床孵育1～4小時(shí)；接著用PBS（pH?7.4）洗去未結(jié)合的熒光二抗或轉(zhuǎn)基因蛋白，最后用熒光顯微鏡觀察結(jié)果。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗體與微珠連接方法，其特征是：

所述步驟1）A中：搖床的轉(zhuǎn)速為50～150轉(zhuǎn)/分；用pH?8的0.1?mM?的EDTA溶液進(jìn)行洗滌；

所述步驟1）B中：搖床的轉(zhuǎn)速為50～150轉(zhuǎn)/分；用pH?8的0.1?mM?的EDTA溶液洗滌；

所述步驟1）C中：將所得的交聯(lián)后產(chǎn)物用pH?8的0.1?mM?的EDTA溶液洗滌。