[發明專利]一種沙門菌熒光定量PCR檢測和分型的引物、探針及試劑盒

有效

• 申請號: 201310068510.8
• 申請日: 2013-03-05
• 公開（公告）號: CN103114148A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 王成明;徐步;王志強;許傳靈;危藍菁;張繼壘
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10;C12Q1/06;C12N15/11
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.一種沙門菌的熒光定量PCR檢測和分型的引物及探針，其特征在于檢測引物為：

上游引物：5’-GATGTTYCTTAGCGCYTTACAGGC-3’?

下游引物:5’-CCGACMGCGTAATATTTGGCTGAC-3’?

所述探針為：

探針-1:5’-ATACGCTTTCCGGCACGGCAAT-6-FAM-3’

探針-2:5’-LCRED640-CGTCRGTGGATTWCCGTCGCCCT-Phosphate-3’。

2.一種沙門菌的熒光定量PCR檢測和分型試劑盒，包括5?倍定量PCR反應液?22?μl,?以及22?μl的5?倍引物和探針的混合液；所述引物和探針混合液含濃度為5?μM?的上游引物、5?μM下游引物、1?μM的探針-1、1?μM的探針-2。

3.一種沙門菌分型方法，該方法包括以下步驟：

（1）用權利要求1引物和探針PCR擴增待測樣本，擴增出210?bp的條帶，且熒光檢測在640nm波長增強的為沙門菌陽性樣本；

（2）PCR完成后，對步驟（1）沙門菌陽性樣本擴增產物進行高分辨率熔解曲線分析，根據熔解溫度對沙門菌進行分型，分型標準是：i）重要的致病菌腸道亞種熔解溫度69.5℃，ii）豪頓亞種，熔解溫度64.2℃；雙亞利桑拉亞種熔解溫度63.8℃，iii）邦戈爾沙門菌熔解溫度54.8℃、英迪加亞種熔解溫度57℃、薩拉姆亞種熔解溫度55.5℃、亞利桑那亞種熔解溫度54.5℃。