[發明專利]一種利用雙熒光素酶報告基因篩選多藥耐藥相關microRNA的方法

有效

• 申請號: 201310065888.2
• 申請日: 2013-03-01
• 公開（公告）號: CN103173480A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 隋華;李琦;朱惠蓉;周利紅;劉宣;季青;靳寶輝;潘樹芳;葉乃菁;宋大遷;范忠澤
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學附屬曙光醫院;上海中醫藥大學附屬普陀醫院
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12Q1/68;C12Q1/66;A61K48/00;A61P43/00
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

1.一種質粒載體，其特征在于，所述的質粒載體是在pmirGLO?Dual-Luciferase-promoter質粒載體的第6832-7349bp區段內插入了人ABCB1基因的3′UTR序列。

2.根據權利要求1所述的質粒載體，其特征在于，所述的人ABCB1基因的3′UTR序列插入在pmirGLO?Dual-Luciferase-promoter質粒載體的sacI和xhoI限制性酶切位點之間。

3.根據權利要求1所述的質粒載體，其特征在于，所述的人ABCB1基因的3′UTR序列包含下述核苷酸序列：

a）如SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列；和/或

b）與SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列。

4.一種利用雙熒光素酶報告基因篩選多藥耐藥相關microRNA的方法，其特征在于，它至少設置以下實驗組：

a）將待測試microRNA和權利要求1-3任一所述的質粒載體共轉染多藥耐藥宿主細胞；

b）將待測試microRNA轉染多藥耐藥宿主細胞，作為對照，

檢測并比較a）組相對于b）組的雙熒光素酶活性變化，確定待測試microRNA是否為多藥耐藥相關microRNA。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，它還包括以下實驗組：c）多藥耐藥宿主細胞組作為空白對照，和/或d）待測試microRNA和權利要求1-3任一所述的質粒載體的突變型質粒共轉染多藥耐藥宿主細胞。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的多藥耐藥宿主細胞是人腸癌多藥耐藥細胞株HCT116/L-OHP。

7.microRNA在制備調控人ABCB1基因3′UTR序列表達的藥物中的用途，其特征在于，所述的microRNA選自：

a）如SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列，或與SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列；或

b）如SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列，或與SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列。

8.microRNA在制備抑制人P糖蛋白表達的藥物中的用途，其特征在于，所述的microRNA選自：

a）如SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列，或與SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列；或

b）如SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列，或與SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列。

9.microRNA在制備逆轉多藥耐藥的藥物中的用途，其特征在于，所述的microRNA選自：

a）如SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列，或與SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列；或

b）如SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列，或與SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列互補的核苷酸序列。