[發(fā)明專利]一種檢測(cè)扎那米韋及含扎那米韋制劑中雜質(zhì)的HPLC測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310058607.0
• 申請(qǐng)日: 2013-02-25
• 公開（公告）號(hào): CN104007185B
• 公開（公告）日: 2017-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馮慧敏;張斐;許向陽(yáng);檀愛民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京先聲東元制藥有限公司;江蘇先聲藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)扎那米韋及含扎那米韋制劑中雜質(zhì)的HPLC測(cè)定方法，屬于藥物雜質(zhì)分析檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

扎那米韋由葛蘭素史克公司研發(fā)，于1999年8月由美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，主要用于治療A型和B型流感，與羅氏公司研發(fā)的磷酸奧司他韋膠囊（商品名：達(dá)菲）為目前國(guó)際上公認(rèn)的流感治療藥物。扎那米韋是自1993年金剛乙胺上市后第一個(gè)獲得批準(zhǔn)的流感治療藥，也是第一個(gè)神經(jīng)氨酸酶抑制劑類流感病毒治療藥。其化學(xué)名為：5-乙酰氨基-4-[（氨基亞氨基甲基）-氨基]-2,6-氫-3,4,5-三去氧-D-丙三醇基-D-半乳糖-2-烯醇酸。分子式C₁₂H₂₀N₄O₇，相對(duì)分子量332.3。本品為白色或類白色粉末，20℃是水中的溶解度約為18mg/ml。

現(xiàn)有的扎那米韋雜質(zhì)分析技術(shù)中色譜柱的選擇主要有C18色譜柱和氨基柱兩類，但都存在明顯缺陷。反相體系以C18色譜柱為代表對(duì)扎那米韋均不保留，盡管通過選用離子對(duì)試劑，能夠適當(dāng)增加扎那米韋的保留，但分析時(shí)間過長(zhǎng)，不適合作為雜質(zhì)質(zhì)量控制的分析方法。另一方面由于扎那米韋顯弱酸性，易在氨基柱中鍵合吸附，造成色譜分離不穩(wěn)定，因此氨基色譜柱不適用于定量定性用。

HILIC柱是一種新型的色譜柱，是正相色譜的變體，其保留強(qiáng)度與溶質(zhì)極性成正比，而與流動(dòng)相成反比。HILIC色譜使用極性固定相，與高有機(jī)相比例的流動(dòng)相。極性固定相從吸附水或其他極性溶劑使固定相表面建立一層水層或極性層，而流動(dòng)相的主體則是非質(zhì)子化溶劑。HILIC色譜是多重保留機(jī)制同時(shí)作用的過程，而首先發(fā)生的是液液分配。在分析過程中化合物在流動(dòng)相與固定相表面的水層或極性層之間進(jìn)行液液分配，極性化合物傾向于分配進(jìn)入高極性的水層或極性層獲得保留，之后還能與固定相表面發(fā)生吸附作用和/或離子交換作用進(jìn)一步增強(qiáng)保留，因此HILIC色譜能夠使極性分析物得到好的保留與分離，并能夠提供相對(duì)于反相色譜近乎正交的選擇性。

HILIC色譜柱適用于在反相色譜柱上不保留的化合物的分離，尤其是對(duì)強(qiáng)極性化合物的保留能力增強(qiáng)。除了對(duì)極性化合物表現(xiàn)出優(yōu)異保留能力外，HILIC色譜柱能夠提高LC/ESI-MS（液質(zhì)聯(lián)用（電噴霧離子源））響應(yīng)信號(hào)，樣品溶液直接兼容SPE（固相萃取）洗脫劑，并且與傳統(tǒng)反相HPLC具有互補(bǔ)的選擇性。

HILIC硅膠柱還具有壽命長(zhǎng)，與各種LC（高效液相）檢測(cè)器兼容，色譜柱間重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。

因此，鑒于扎那米韋及含扎那米韋制劑中雜質(zhì)的現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)的缺陷，對(duì)應(yīng)用HILIC色譜柱檢查扎那米韋及含扎那米韋的相關(guān)制劑中雜質(zhì)的測(cè)定方法進(jìn)行研究是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于通過對(duì)固定相、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)等方面的改進(jìn)，提供一種檢測(cè)扎那米韋及含扎那米韋制劑中雜質(zhì)的HPLC測(cè)定方法。該發(fā)明選用HILIC柱進(jìn)行檢測(cè)，不但扎那米韋能夠得到適當(dāng)保留，而且流動(dòng)相配制簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，分析時(shí)間合適，與MS（質(zhì)譜）匹配度好，靈敏度高，分析方法穩(wěn)定，柱壽命長(zhǎng)等優(yōu)勢(shì)。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明提供了一種檢測(cè)扎那米韋及含扎那米韋制劑中雜質(zhì)的HPLC測(cè)定方法，其特征在于：固定相選用HILIC色譜柱，分離機(jī)制為親水作用色譜法（hydrophilic interaction liquid chromatography,HILIC），流動(dòng)相選自極性有機(jī)溶劑-緩沖鹽溶液或極性有機(jī)溶劑-弱酸溶液或極性有機(jī)溶劑水溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)范圍為200nm~240nm。其中HILIC色譜柱為極性固定相，所述極性固定相選自未衍生化硅膠或修飾氨基、氰基和羥基等極性基團(tuán)的硅膠柱等。

進(jìn)一步，流動(dòng)相為乙腈-緩沖鹽溶液或乙腈-弱酸溶液或乙腈-水溶液，優(yōu)選乙腈-緩沖鹽溶液。再進(jìn)一步，所述的流動(dòng)相中乙腈與緩沖鹽溶液的比例為50~90：50~10，優(yōu)選60~70：40~30，所述的流動(dòng)相中乙腈與弱酸溶液的比例為50~90：50~10，優(yōu)選60~70：40~30，所述的流動(dòng)相中乙腈與水的比例為50~90：50~10，優(yōu)選60~70：40~30。

再進(jìn)一步，所述的緩沖鹽溶液選自甲酸銨緩沖鹽體系、乙酸銨緩沖鹽體系、磷酸鹽緩沖鹽體系或者它們之間任意配比形成的混合溶液，優(yōu)選甲酸銨緩沖鹽體系或乙酸銨緩沖鹽體系。其中所述甲酸銨緩沖鹽體系選自甲酸銨溶液、甲酸銨加甲酸溶液、甲酸銨加乙酸溶液；所述乙酸銨緩沖鹽溶液選自乙酸銨溶液、乙酸銨加甲酸溶液、乙酸銨加乙酸溶液。

再進(jìn)一步，所述緩沖鹽溶液優(yōu)選甲酸銨溶液。