[發明專利]一種從植物莖部組織中分離質外體汁液的方法

有效

• 申請號: 201310058076.5
• 申請日: 2013-02-25
• 公開（公告）號: CN103115810A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 李銀心;陳顯揚;郭杰
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種從植物莖部組織中分離質外體汁液的方法，特別涉及一種從鹽角草等葉片退化植物的莖部組織中分離質外體汁液的方法。

背景技術

植物質外體（apoplast）是由細胞膜外構成細胞壁的纖維和微晶體空間以及充滿水和空氣的細胞間隙所組成，分化完成的木質部也屬于質外體[Sattelmacher?B.The?apoplast?and?its?significance?for?plant?mineral?nutrition.New?Phytologist,2001,149:167-192.]。它是一個動態空間，其中的質外體液涉及到許多重要的生理生化過程，如溶質和水分運輸、細胞內環境的動態平衡、生長與發育、信號轉導以及抵抗逆境等等[Sakurai?N.Dynamic?function?and?regulation?of?apoplast?in?the?plant?body.Journal?of?Plant?Research,1998,111:133-148.]。

目前普遍采用的提取質外體汁液方法是直接離心法。1980年Terry和Bonner用此法成功地提取了豌豆質外體汁液。用酸溶液淋洗豌豆幼苗的莖段切口后，將植物材料（莖段或葉片）置于特定容器（如針管）內，在離心力的作用下，使質外體的汁液分離出來。通過測定蘋果酸脫氫酶或磷酸己糖異構酶的活性，來選取最佳離心時間和最佳離心力，以減少切口胞漿造成的污染。他們發現，離心力在500～3000×g范圍內，細胞膜幾乎未受到損壞，膜內滲出物質污染小于1.5%，計算時可以忽略不計[Terry?ME,Bonner?BA.An?examination?of?centrifugation?as?a?method?of?extracting?an?extracellular?solution?from?peas,and?its?use?for?the?study?of?indoleacetic?acid-induced?growth.New?Phytologist,1980,66:321-325.]。但是，通過對向日葵質外體液梯度離心分離的摸索，發現在2000-2500g之間分離的液體，為相對高純度的外置體液，其他離心力分離出來的液體純度出現明顯的下降[Dannel?F,Pfeffer?H,Marschner?H.Isolation?of?apoplasmic?fluid?from?sunflower?leaves?and?its?use?for?studies?on?influence?of?nitrogen?supply?on?apoplasmic?pH.Journal?of?Plant?Physiology,1995,146:273-278.]。

通過這些研究看出，分離不同植物質外體液的離心速率不盡相同。而迄今為止，還沒有對地上部分葉片退化的植物質外體液的分離報道。對于葉片退化的植物，分析質外體液的組分和特性，往往可以發現植物特殊的物質交換途徑。

發明內容

本發明的目的是提供一種從植物莖部組織中分離質外體汁液的方法。

本發明所提供的從植物莖部組織中分離質外體汁液的方法，具體可包括如下步驟：

（1）將成段的待分離植物莖部組織置于二通管中，使所述待分離植物莖部組織不會從所述二通管的底孔漏掉；

所述二通管的頂孔較大，底孔較小；較大的頂孔保證所述待分離植物莖部組織順利放入所述二通管中，較小的底孔保證所述待分離植物莖部組織不會從所述二通管的底孔漏掉（即使離心的過程中也不會漏掉），有效的集中微量的離心液，同時保證所述待分離植物莖部組織與離心液的有效分離。

所述待分離植物莖部組織為去除了中柱后的莖部組織，這樣可以減少離心過程中中柱汁液對于質外體汁液的污染；

（2）將步驟（1）中裝有所述待分離植物莖部組織的所述二通管置于離心管中，使所述二通管的頂孔對應離心管的管口；

（3）離心，獲得為從所述待分離植物莖部組織中分離得到的質外體汁液。

在上述方法的步驟（3）中，所述“離心，獲得為從所述待分離植物莖部組織中分離得到的質外體汁液”的方法具體包括如下步驟：

（a1）以離心力A離心，除去所得的離心液1；

（a2）以離心力B離心，收集所得的離心液2；所述離心液2即為從所述待分離植物莖部組織中分離得到的質外體汁液；

所述離心力A和所述離心力B滿足如下條件：

（b1）所述離心力B為分離所述質外體汁液的最適離心力，所述離心力A低于所述離心力B；