[發明專利]一種制備酪蛋白磷酸肽的方法

無效

• 申請號: 201310054681.5
• 申請日: 2013-02-20
• 公開（公告）號: CN103114118A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 陳曉春;蔡家棟;張磊;黃小權;盛兵;湯亦文;李淑亞
• 申請（專利權）人: 南京同凱兆業生物技術有限責任公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及到一種制備酪蛋白磷酸肽的方法。

背景技術

酪蛋白磷酸肽（CPPs）是以牛乳酪蛋白為原料經單一或復合酶催化水解、分離、純化而制得的含有成簇磷酸絲氨酸的一種天然生物活性多肽。它可作為無機離子的載體，在pH中性至微堿性的動物小腸下端，能與鈣離子、亞鐵離子和鋅離子等結合，阻止金屬離子與磷酸根產生沉淀，使小腸內可溶性的鈣、鐵和鋅的濃度增加，從而促進這些必需金屬離子的吸收和利用。此外，在動物和人的試驗中，CPPs表現出抗齲齒、抗骨丟失、增強受精和胚胎發育等的作用。

我國居民平均每天鈣攝入量只有405.4mg，只占每日推薦量的50%左右，在有些地區兒童佝僂病的發病率可達40%，骨質疏松癥也是困擾老人的常見疾病之一。因此，對于我國來說，全民補鈣顯得尤為重要。而補鈣時不僅要注重鈣的攝入，更要注重鈣的吸收。而CPPs由于能夠促進鈣吸收的這一功能，其市場應用前景相當廣闊。

目前酪蛋白磷酸肽的主要生產方法是酶解法，即在水解罐中用蛋白酶對底物酪蛋白進行水解，水解結束后高溫滅酶，再調節反應液pH使未水解的酪蛋白沉淀，離心后噴霧干燥而制得。工藝過程中主要存在以下問題：1、酶不能循環利用，生產成本高。2、產酶酶解不徹底。3、產品純度低，質量得不到保證。

發明內容

本發明要解決的問題是提供一種制備酪蛋白磷酸肽的方法，盡可能的提高原料的利用率和產品的品質。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：

一種制備酪蛋白磷酸肽的方法，該方法包括如下步驟：

(1)在酪蛋白中加入蛋白酶進行酶解反應；

(2)利用超濾膜分離出酶解產物酪蛋白磷酸肽；

(3)超濾后的產物酪蛋白磷酸肽經納濾膜脫鹽處理后即得；

(4)超濾膜截留液繼續加入蛋白酶進行酶解反應，重復步驟(2)和(3)。

步驟(1)和(4)中，所述的蛋白酶為堿性蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、復合蛋白酶中的任意一種或幾種的混合物。

步驟(1)和(4)中，所述的酶解反應條件為：溫度30~60℃，攪拌速度50~300rpm，反應時間0.5~5h，酪蛋白原始反應濃度為20~200g/L，蛋白酶濃度為0.2~2g/L，pH為6~9。

步驟(2)中，所述的超濾膜為聚砜超濾膜，膜截留分子量為1000～10000道爾頓。

步驟(2)中，所述的超濾膜為中空纖維式膜、板框式膜、卷式膜或管式膜。

步驟(3)中，所述的納濾膜為聚砜納濾膜，膜截留分子量為150～1000道爾頓。

步驟(3)中，所述的納濾膜為中空纖維式膜、板框式膜、卷式膜或管式膜。

有益效果：本發明相對于現有技術具有如下優點：

1、重復利用酶液和底物，降低生產成本。

2、利用超濾膜和納濾膜組合分離酪蛋白磷酸肽，得到高品質的產品。

3、本發明所涉及的反應條件溫和，能耗低，適合大規模連續化生產。

具體實施方式

根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的內容僅用于說明本發明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發明。

實施例1：

向反應釜中加純水20L，開攪拌200rpm，加熱至45℃,向反應釜中緩慢投入酪蛋白2Kg，將pH調至7.0；投入木瓜蛋白酶10g。酶解1小時后，將料液降溫到30℃以下，用6000道爾頓的卷式超濾膜超濾，濃縮到4L，收集透過液至離心液收集罐。濃縮液加純水到16L回到酶解罐中，升溫到45℃，調節pH為7.0，繼續酶解。酶解1小時后，將料液降溫到30℃以下，超濾濃縮到4L，收集透過液到離心液收集罐。濃縮液再一次加純水到16L回到酶解罐中，升溫到45℃，調節pH為7.0，繼續酶解，1h后酶解結束。調pH4.6滅酶。用離心機離心，離心液至離心液收集罐。用300道爾頓的卷式納濾膜納濾離心液，納濾到10L后，在納濾罐中添加純水，繼續納濾。添加6次共60L純水脫鹽，將物料最終納濾到5L。噴干得到產品1.03kg，CPP含量16.3%，蛋白含量90%。

實施例2：