[發明專利]西瓜抗枯萎病基因Fon-1連鎖的SNP位點及標記有效
| 申請號: | 201310052303.3 | 申請日: | 2013-02-18 |
| 公開(公告)號: | CN103146691A | 公開(公告)日: | 2013-06-12 |
| 發明(設計)人: | 許勇;張屹;張海英;郭紹貴;任毅;宮國義;張潔;孫宏賀 | 申請(專利權)人: | 北京市農林科學院;北京京研益農科技發展中心 |
| 主分類號: | C12N15/11 | 分類號: | C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司: | 北京國林貿知識產權代理有限公司 11001 | 代理人: | 李桂玲;孔祥玲 |
| 地址: | 100097 北京市海淀*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 西瓜 枯萎病 基因 fon 連鎖 snp 標記 | ||
技術領域
本發明屬于基因序列及其獲取方法領域,具體涉及西瓜抗枯萎病基因Fon-1連鎖的SNP位點及標記及其獲得方法。
背景技術
西瓜屬葫蘆科黃瓜屬(Citrullus?lanatus),是一種國內外廣泛栽培的重要經濟作物。我國西瓜已有千年的種植歷史和很高的經濟價值,是當今增加農民收入的重要經濟作物之一,已成為我國具有國際競爭力和較大經濟增長空間的重要園藝作物。據聯合國糧農組織統計,我國西瓜年產量占世界的67%,也是全球西瓜人均消費量最大的國家。
西瓜枯萎病是由半知菌亞門鐮孢屬尖孢鐮刀菌西瓜專化型(Fusarium?oxysporum?f.sp.niveurn)寄生引起的一種世界性真菌土傳病害,是世界范圍內西瓜生產中導致西瓜產量和品質降低的最嚴重障礙,引起了世界各國的廣泛重視。目前,已有文獻報道的尖孢鐮刀菌西瓜專化型生理小種有4個,0、1、2和3,生理小種3能引起兼抗生理小種0、1和2的野生種質PI296431-FR感病,但在我國尚未有報道,且尚需進一步證實。生理小種1是我國致病力最強、存在范圍最廣的重要生理小種,盡管國內外國西瓜育種工作者選育了一批抗生理小種1的抗病品種,但傳統抗病育種選育效率低問題尚未解決。迄今為止沒有一種化學農藥可以有效控制枯萎病的發生,生產上主要靠采用的嫁接栽培措施能有效防治。但容易降低西瓜品質,選育抗枯萎病品種是有效控制西瓜枯萎病最安全、經濟的途徑。因此,開發西瓜抗枯萎病基因連鎖標記,將有利于高效改良西瓜的枯萎病抗性,為西瓜抗病分子育種提供技術支撐。
傳統育種方式費時費力,需要非常大的群體對枯萎病菌的抗性進行嚴格篩選。利用與抗病性狀緊密連鎖的分子標記進行品種初期篩選,達到分子輔助育種的目的,可大大縮短育種的周期。序列比對是基于DNA測序基礎上,對已知的基因組序列進行比較,可迅速獲得目的性狀特有的候選SNP位點。并將結合遺傳分離群體分析及自然群體分析,可迅速找到與目的性狀緊密連鎖的標記用于輔助育種,大大縮短了傳統基因定位的時間。
就現有技術而言,獲取西瓜枯萎病生理小種1抗性基因緊密連鎖SNP位點及標記需要克服的主要缺陷是西瓜枯萎病苗期表型鑒定,西瓜苗期枯萎病表型很難確定,很大程度上受環境以及其它病蟲害的影響,表型鑒定結果準確度直接影響著Fon-1基因的定位以及與其緊密連鎖分子標記的獲取;另外迅速找到與目的性狀緊密連鎖的標記需要以西瓜基因組信息為依托,需要對枯萎病確定的抗、感性狀重測序進行序列比對才能更快速地獲得與表型符合的候選SNP位點,最終開發與西瓜枯萎病生理小種1抗性基因Fon-1的緊密連鎖標記。
發明內容
本發明的目的是提供西瓜抗枯萎病基因Fon-1連鎖的SNP位點及標記及其獲得方法。
本發明的目的是通過以下技術方案實現的:
所述的西瓜抗枯萎病基因Fon-1連鎖的SNP位點及標記,具有序列表中的SEQ?ID?NO:1~8的核苷酸堿基序列。
序列表中SEQ?ID?NO:1為引物208089_fon對抗病材料特異性擴增的核苷酸堿基序列;
序列表中SEQ?ID?NO:2為引物208089_fon對感病材料特異性擴增的核苷酸堿基序列;
序列表中SEQ?ID?NO:3為引物458344_fon對抗病材料特異性擴增的核苷酸堿基序列;
序列表中SEQ?ID?NO:4為引物458344_fon對感病材料特異性擴增的核苷酸堿基序列;
序列表中SEQ?ID?NO:5為引物459624_fon對抗病材料特異性擴增的核苷酸堿基序列;
序列表中SEQ?ID?NO:6為引物459624_fon對感病材料特異性擴增的核苷酸堿基序列;
序列表中SEQ?ID?NO:7為引物502124_fon對抗病材料特異性擴增的核苷酸堿基序列;
序列表中SEQ?ID?NO:8為引物502124_fon對感病材料特異性擴增的核苷酸堿基序列;
本發明的目的是通過以下另一技術方案實現的:
所述的西瓜抗枯萎病基因Fon-1連鎖的SNP位點及標記的獲取方法,該獲取方法包括如下步驟:
A、供試材料選取:選取供試材料;
B、所述的西瓜抗枯萎病基因Fon-1的初步定位:
對所述供試材料進行苗期抗病接種鑒定,得到抗、感池材料;利用集團混合分析法,提取其基因組DNA,構建抗、感DNA池,
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