[發明專利]一種應用miR-181a逆轉乳腺癌耐藥的方法

無效

• 申請號: 201310049732.5
• 申請日: 2013-02-07
• 公開（公告）號: CN103083685A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 魏敏杰;趙琳;焦旭陽;何苗;吳慧哲;任婕;唐宏濤;趙鵬飛
• 申請（專利權）人: 魏敏杰
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P15/14;A61P35/00
• 代理公司: 沈陽智龍專利事務所(普通合伙) 21115
• 代理人: 宋鐵軍

技術領域：

本發明提供一種治療腫瘤藥物領域，特別涉及一種miR-181a在逆轉乳腺癌細胞耐藥中的應用。

背景技術：

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴重影響著婦女的身心健康甚至危及生命。化療是乳腺癌治療的常用方法，但化療過程中出現的耐藥問題嚴重影響了臨床療效和患者預后。與乳腺癌耐藥作用密切相關的乳腺癌耐藥蛋白(breast?cancer?resistant?protein,BCRP)是從耐藥的人乳腺癌細胞株MCF7/AdrVP中用mRNA指紋分析法分離出來的跨膜半轉運蛋白。其基因定位于人染色體4q22，由ABCG2基因編碼，2.4kb?mRNA翻譯的655個氨基酸殘基構成，含有一個ATP結合域和一個疏水性跨膜結構域，是繼多藥耐藥相關蛋白(MRP)、P糖蛋白(P-gp)和肺耐藥蛋白(LRP)之后，腫瘤多藥耐藥機制研究中的又一熱點蛋白。BCRP通過水解ATP供能將轉運底物（化療藥物）從細胞內逆濃度梯度泵到細胞外，使乳腺癌細胞內米托蒽醌（MX）、拓撲替康等濃度下降，從而導致細胞對藥物抵抗、誘導耐藥性產生。

近年來微小RNA(microRNA，miRNA)在逆轉耐藥中的作用受到相關學者的關注。miRNA是長度約22nt的內源性單鏈的非蛋白編碼RNA，在個體發育、細胞分化、增殖、凋亡等生理活動中以及在腫瘤發生、發展等病理過程中起重要調控作用。miRNA一般通過與目標mRNA分子的3’端非編碼區域（3’UTR）特異結合調節基因的表達。由于BCRPmRNA-3’UTR長度約為2kb(Genebank:accession?no.NM_004827;UTR數據庫:UTR?database?entry?UTR:3HSA117529)，遠長于人類mRNAs-3’UTR的平均長度700bp，因此，提示BCRPmRNA-3’UTR可能存在miRNA調控BCRP表達的作用靶點。

一些研究證實某些miRNAs可通過作用于BCRPmRNA-3’UTR調節BCRP的表達。Wang等在胰腺癌細胞的研究發現miR-520h能夠下調BCRP的蛋白表達水平；To?KK等在結腸癌細胞的研究結果也證實了這一點：miR-519c具有降低SI結腸癌細胞內源性BCRP轉錄及蛋白表達作用；Pan等研究發現在耐藥的乳腺癌細胞MCF-7/MX100中轉染miR-328或miR-519c后BCRP的蛋白表達水平明顯下降。可見miRNA對靶向調控BCRP參與乳腺癌耐藥起到了關鍵的作用。

本發明中我們應用生物學信息分析可得到，BCRPmRNA-3’UTR存在miR-181a調控BCRP表達的作用靶點，但是miR-181a是否對BCRP的表達進行調節以及由此而逆轉乳腺癌細胞的耐藥目前尚不清楚。因此，本發明在乳腺癌藥物敏感細胞MCF-7（BCRP低表達）和耐藥細胞MCF-7/MX（BCRP高表達）中，分別轉染miR-181a?inhibitor和miR-181a?mimic，構建miR-181a沉默表達和過表達的乳腺癌細胞模型，及對裸鼠進行MCF-7/MX細胞皮下注射，構建在體移植瘤模型，MX處理上述模型后，觀察細胞及小鼠對MX的敏感性、BCRP的表達及細胞內MX含量變化，探討離體和在體水平時miRNA-181a對乳腺癌細胞耐藥性的影響及可能機制。

發明內容：

本發明所要解決的技術問題是提供一種應用miR-181a逆轉乳腺癌細胞耐藥的方法。

本發明是通過以下技術方案來實現的：

一種應用miR-181a逆轉乳腺癌耐藥的方法，所述方法包括：

（1）利用miR-181a的模擬物miR-181a?mimic，抑制乳腺癌耐藥細胞MCF-7/MX中的BCRP表達與藥物轉運功能，增加對BCRP轉運底物鹽酸米托蒽醌MX的敏感性；

（2）利用miR-181a的模擬物miR-181a?agmir脂質體，靶向抑制MCF-7/MX誘導的乳腺癌裸鼠移植瘤內BCRP的表達，增加在體瘤細胞對MX的藥物敏感性；

（3）利用miR-181a的抑制劑miR-181a?inhibitor上調藥物敏感細胞MCF-7的BCRP表達和藥物轉運功能，增加對MX的耐藥性。

步驟（1）中miR-181a模擬物miR-181a?mimic為包含miR-181a核酸序列“莖-環”結構的發夾狀結構，主要序列如下：5’-AACAUUCAACGCUGUCGGUGAGU-3’。步驟（1）中所述腫瘤細胞為乳腺癌耐藥細胞MCF-7/MX。乳腺癌耐藥細胞MCF-7/MX為過表達BCRP乳腺癌細胞。