[發明專利]與PD-1和VEGF高效結合的融合蛋白、其編碼序列及用途

有效

• 申請號: 201310046985.7
• 申請日: 2013-02-06
• 公開（公告）號: CN103965363B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 錢其軍;金華君;王倩;丁娜;嚴巧靈;劉輝;俞德超;李林芳;吳孟超
• 申請（專利權）人: 上海白澤生物科技有限公司;上海細胞治療集團有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/15;C12N5/10;A61K38/17;A61K48/00;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 劉海羅

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種與PD?1和VEGF高效結合的融合蛋白、其編碼序列及用途。具體地，本發明涉及一種分離的融合蛋白，其包含如下肽段：（1）人類PD?L2的胞外區肽段；（2）人類FLT?1胞外區第2個免疫球蛋白樣結構域的肽段或/和KDR胞外區第3個免疫球蛋白樣結構域的肽段；以及任選的（3）人類免疫球蛋白的Fc段。本發明的融合蛋白能夠抑制腫瘤細胞生長，促進其死亡，抑制T細胞失活，增強殺瘤能力。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種與PD-1和VEGF高效結合的融合蛋白、其編碼序列及用途。

背景技術

單克隆抗體靶標明確，臨床應用安全性好、療效明顯，目前共有10個腫瘤單克隆抗體經美國FDA批準上市銷售，已成為多種類型惡性腫瘤治療的一線藥物。然而一方面，全長抗體分子量大，不易進入實體瘤組織，難以在腫瘤內部達到有效治療濃度，從而發揮抗腫瘤療效。另一方面，腫瘤發病機制復雜，細胞內信號通路冗余或交叉，單一靶標的治療療效不足且易形成耐藥性。而應用多個針對不同靶標的單抗進行聯合治療，療效雖優于單一靶標治療，但費用非常昂貴，患者難以承擔。因而，非常必要研制分子量小、多靶點的抗體類蛋白藥物。

程序性死亡分子1（programmed death-1 receptor，PD-1）是T細胞天然免疫抑制分子，腫瘤細胞可通過過量表達其細胞表面PD-1的配體（PD-L1/PD-L2），作用于T細胞表面PD-1，激活PD-1通路，誘導T細胞凋亡，形成免疫逃逸及耐受。因而，PD-1已成為腫瘤治療的重要靶標。一項PD-1抗體（BMS-936558或MDX-1106）的I期臨床試驗（296例患者）表明，PD-1抗體能使四分之一至五分之一的非小細胞肺癌患者，黑色素瘤患者，或腎細胞癌患者產生客觀反應（J Clin Oncol.2010;28:3167-75；N Engl J Med.2012;366:2443-54），顯示其具有良好的臨床應用價值。

VEGF有促進血管生成的作用，腫瘤細胞可大量分泌VEGF，作用于其受體VEGFR1（Vascular endothelial growth factor receptor 1,也稱作FLT-1）及VEGFR2（Vascularendothelial growth factor receptor 2,也稱作KDR），誘導腫瘤組織新生血管的生成，使腫瘤體積快速擴張（Nat Med.1999;5:1359-64）；此外，VEGF可以抑制DC的分化與成熟，抑制機體的抗腫瘤T細胞免疫應答而逃避免疫監視（Blood.2003;101:4878-86）。目前，針對VEGF的單抗Bevacizumab（Avastin）已經由美國FDA批準上市銷售，廣泛應用于結腸癌、乳腺癌、非小細胞性肺癌、腎癌、神經膠質瘤的治療，2010年銷售額達64.6億美元。

有意思的是，Flt-1或KDR的胞外區多肽也可在體外阻斷VEGF信號通路，抑制血管內皮細胞的生長（Cancer Res.2002;9:633-40）。通過基因工程技術，將Flt-1與KDR胞外區段中的某些特定免疫球蛋白樣（Ig樣）結構域（如Flt-1的第2Ig樣結構域Flt1-D2，KDR的第3Ig樣結構域KDR-D3）融合，可有效阻斷細胞VEGF信號通路（Proc Natl Acad SciUSA.2002;99:11393-8；Gene Ther.2009;16:10-6）。

因而，如能同時阻斷腫瘤細胞VEGF及T細胞PD-1通路，有望有效抑制腫瘤生長，消除免疫耐受，發揮抗腫瘤作用。

發明內容

本發明人經過深入的研究和創造性的勞動，得到了一種融合蛋白，本發明人驚奇地發現，其能夠與PD-1、VEGF高效結合，同時阻斷腫瘤細胞VEGF及T細胞PD-1通路，具有顯著的抗腫瘤作用，有應用于制備防治惡性腫瘤的藥物或基因治療藥物的潛力。由此提供了下述發明：

本發明的一個方面涉及一種分離的融合蛋白，其包含如下肽段：

1）人類PD-L2的胞外區肽段；